PRRSV是一種傳染病,長期威脅著中國養豬業,給中國養豬業造成了最大的損失。 規模化養豬場可以通過綜合防控措施與免疫接種相結合來防控疫情,而中小型豬場只能更多地依靠免疫接種。 PRRSV免疫的最大挑戰是疾病變異頻繁,不同菌株之間的交叉保護並不理想。
表1:目前在中國流行的主要PRRSV毒株。
根據ORF5區域的系統發育關係,基於系統發育譜系的PRRSV分型方法:
PRRSV-1毒株分為4個亞型,I亞型(全球)、I亞型(俄羅斯)、II亞型和III亞型)。
PRRSV-2 菌株分為 9 個分支 (L1-L9)。
PRRSV-2目前廣泛流行,具有高度的遺傳多樣性,9個分支可進一步劃分為若干亞分支。
其中,PRRSV-2的L1分支在美國和亞洲的養豬業中最為普遍和多樣化,具有全球趨勢。
美國:2021 年,L1 分支(NaDC30-Like 和 NaDC34-Like)仍然是最普遍和最多樣化的譜系。
南韓和日本:L1 分支 (18個亞系;NADC30-like)是第二大PRRSV組。
中國:L1分支已成為中國的主要流行菌株(64%)。
L1分支NADC30樣菌株的致病性差異較大,我國部分NADC30樣菌株表現出較高致病性。
目前,疫苗被廣泛用於PRRSV的預防和控制。
在中國,目前有兩種型別的PRRS疫苗:減毒活疫苗和滅活病毒疫苗。
目前,中國有9種商業疫苗用於控制和預防PRRSV感染,包括L8包覆活疫苗(CH-1R、JXA1-P80、HUN4-F112、TJM-F92、GDR180和PC)和L5包覆活疫苗(Respprrs MLV Ingelvac PRRS)。MLV)和L8分支滅活疫苗(CH-1A株),這些疫苗的應用在我國PRRS的防控中發揮了重要作用,但在國際上尚無針對性NADC30 PRRSV 樣 L1 分支 PRRSV有效的疫苗。
中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所豬病綜合防控創新團隊和豬藍耳病偽狂犬病研究創新團隊在全球率先開展了L1分支PRRSV候選疫苗sd-r並評價了該菌株對同源和異源菌株的保護作用。
研究人員測量了大量NaDC30樣PRRSV全基因組序列分析表明,NSP9和GP2-3是中國NADC30樣PRRSV重組的熱點隨後,篩選出在兩個重組熱點處具有小片段重組且致病性輕度的NadC30 PRRSV樣SD菌株,並通過亞傳代減弱,獲得穩定傳代對MARC-145細胞的細胞毒性(SD-R菌株,F125代)。 與親本株相比,SD-R候選疫苗在氨基酸中共產生31個穩定突變,在非翻譯區產生4個核苷酸
由於不同Nadc30樣PRRSVs的全基因組同源性低,重組模式複雜,本研究選擇NADC30樣PRRSV HLJWK108-1711菌株(重組模式複雜,與SD菌株的全基因組核苷酸同源性為89。9%)用於評價交叉保護效果。
SD-R候選疫苗的高劑量免疫對仔豬是安全的
通過qPCR評估血清樣本和10個器官組織:
高劑量組:接種後次日採集血清樣本。
重複劑量組:接種後和 28 天時收集血清樣本。
僅在接種疫苗後 7 或 14 天的血清樣本中檢測到低水平的病毒拷貝。 此外,在肺、扁桃體、淋巴結和少量組織中檢測到低水平的病毒拷貝(圖 1)。
圖1 高劑量組(a)和(b)以及重複劑量(c)組10個組織或血清中的病毒載量與攻擊後的對照組相比,疫苗株免疫不會引起病毒血症,並顯著降低血液和組織中的病毒載量
接種SD-R候選疫苗後,免疫豬未檢測到病毒血症,與攻擊對照組相比,免疫組血液中的病毒載量顯著降低,組織中的病毒載量顯著降低(圖2)。
圖2 NADC30 PRRSV SD株和HLJWK108-1711株攻擊後各組病毒血症和組織病毒載量的變化與對照組相比,SD-R免疫接種後應藥可顯著改善體溫公升高及臨床表現
免疫挑戰組的體溫僅短暫公升高,明顯低於對照挑戰組。 未免疫接種的受感染組經歷了長時間的體溫公升高(圖3)。
SD菌株和HLJWK108-1711菌株在攻擊組均表現出不同程度的食慾不振(每日體重減輕),而免疫攻擊組的每日體重增加沒有變化(圖3)。
圖3 NADC30 PRRSV SD菌株和HLJWK108-1711菌株攻擊後體溫和體重的變化SD-R 免疫後 7-14 天產生 N 蛋白抗體(平均 SP 小於 2.)0),攻擊後7-10天,仔豬抗體水平公升高
圖4 NADC樣30 PRRSV SD株和HLJWK108-1711株攻擊後的PRRSV抗體水平病理分析顯示,對照組激發後肺部表現為典型的斑片狀實變和淋巴結出血,免疫激發組無明顯病理改變(圖5)。
圖5 NADC30 PRRSV SD菌株和HLJWK108-1711菌株攻擊後的病理學和組織病理學變化。
與CH-1A或HP-PRRSV不同,NADC30樣PRRSV具有較低的全基因組相似性,並且原始疫苗不如預防該毒株有效。
幾乎所有 NADC30 樣 PRRSV 都是重組病毒。 雖然重組位置相對隨機,但統計分析表明重組熱點的核苷酸位置約為 7900 至 8100 (NSP9) 和 12400 至 13500 (GP2-GP3)。。研究人員選擇了具有上述兩個重組區域(NSP9 區域的 7365-7661 和 GP2-GP3 區域的 12305-12773)的 NADC30 樣 PRRSV SD 在 MARC-145 細胞中傳代候選疫苗株具有以下特點
穩定性好;它對不同的NADC30 PRRSV樣菌株具有保護作用;
基於SD-R的高劑量和重複劑量試驗對所有仔豬都是安全的,包括無發熱、無臨床體徵,只有少數免疫仔豬在肺、扁桃體和淋巴結中檢測到低水平的病毒血症;
良好的保護。
該候選疫苗有可能開發出一種用於預防和控制NADC30樣PRRSV的商業疫苗。
公司開發了豬疫、禽病、反芻動物、水產動物螢光PCR試劑和抗體檢測試劑,配套螢光定量PCR儀、核酸自動提取儀、酶標儀等裝置,可準確診斷動物傳染病,指導疾病防控。