細胞培養是生物學領域的重要研究工具。 支原體汙染是細胞實驗過程中常見的微生物汙染之一。 支原體汙染可直接影響細胞狀態,降低動量構建實驗結果的可信度,重現性差。
因此,在日常實驗過程中,應注意實驗室的清潔。 普通細胞一旦發生支原體汙染,建議直接丟棄,對實驗環境進行消毒。 如果細胞非常珍貴,不能隨意丟棄,則需要支原體抑制劑清除劑。
德國Minerva Biolabs生產的支原體去除試劑系列:Zell Shield、Mynox、Mynox Gold,可有效去除支原體汙染。
對於已經費力擴增的細胞(例如,在體外轉染或刺激),如果在細胞中發現支原體汙染,但細胞不想被丟棄並希望繼續培養,則建議使用MB生產的複方抗生素Zell Shield。
1)每次使用Zell Shield前,在通過細胞時,先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法”對細胞進行處理,然後使用含有Zell Shield的培養基對細胞進行滋養,可以達到更好的去除支原體的效果。
2)Zell Shield通常存放在-18中,建議使用前熔化並分開,仍然在-18避光,使用時根據需要熔化和準備。避免反覆凍融迴圈。
3)Zell Shield可以直接新增到濃度為1:100的培養基中。例如:在500ml培養基中加入5ml Zell Shield,50ml瓶Zell Shield可用於5L培養基。
如果是珍貴的樣本或病毒收穫物,不能長時間培養,建議使用德國MB公司的Mynox3小時,直接殺滅。
1) 將 200 lmynox** 溶液混合到 2 中混合8ml培養基(FBS濃度小於5%),加入10個4-10 5個細胞。 孵育2-3小時。
2) 終止**並用液體更換細胞。
3)使用原來的正常培養基,傳代3-4次(FBS恢復到原來的濃度)。
4)取樣、PCR檢測,鑑別支原體是否被完全清除。
非常珍貴的細胞或生物樣本不容易獲得,被支原體汙染,但需要打撈且不能丟棄,例如稀有細胞種子。 可以使用完全去除支原體。 如果細胞可以培養乙個月以上,建議使用德國MB公司的Mynox Gold,這是直接殺傷+鞏固保護的兩步法處理。
1) 將 500 L 主**溶液與 4 混合5ml培養基,在離心管中充分混合。
2) 將製備好的**液體培養基轉移到培養瓶或培養皿中。
3) 新增 10 4-10 5 個單元格。
4)培養細胞至80%-90%匯合度。
5) 細胞傳代,需要傳代細胞、實變液、9混合5ml原始培養基後,將其轉移到燒瓶或培養皿中。
6) 重複 (4) 和 (5) 2 次後,再次通過而不新增 Mynox Gold。
7)取樣,PCR檢測,鑑別支原體是否完全清除。