紫外-可見分光光度法是一種測定190 800 nm波長範圍內物質吸光度的方法，用於鑑定、雜質檢測和定量測定。 當光通過被測物質的溶液時，物質對光的吸收程度隨光的波長而變化。 因此，通過測量物質在不同波長下的吸光度並將其吸光度繪製為波長的函式來獲得被測物質的吸收光譜。 從吸收光譜可以確定最大吸收波長; 最大和最小吸收波長最小值 物質的吸收光譜具有與其結構相關的特性。 因此，可以通過將樣品在特定波長範圍內的光譜與對照光譜或參考光譜進行比較，或通過確定最大吸收波長，或通過測量兩個特定波長的吸光度比來識別物質。 定量時，在最大吸收波長下測定一定濃度的試樣溶液的吸光度，將某濃度的對照溶液的吸光度與一定濃度的對照溶液的吸光度進行比較，或用吸收係數法計算試樣溶液的濃度。
儀器的校準和驗證。
1.波長。
由於環境因素對機械部分的影響，儀器的波長往往略有變化，因此除了對所使用的儀器進行定期的綜合校準外，測量前還應對被測波長進行校準。 常用汞燈中更強的光譜線23783nm，253.65nm，275.28nm，296.73nm，313.16nm，334.15nm，365.02nm，404.66nm，435.83nm，546.07nm 與 57696nm；或與儀器中的氘燈486配合使用02nm 與 656用於校正的L0nm光譜線; 波長為 279 的鈥玻璃4nm，287.5nm，333.7nm，360.9nm，418.5nm，460.0nm，484.5nm，536.2nm 與 637在5nm處有尖銳的吸收峰，也可用於波長校正，但由於隨時間變化不同**或略有變化，使用時應注意; 近年來，雙光束儀器常採用高氯酸鈥溶液進行校準，以10%高氯酸溶液為溶劑製備含4%氧化鈥（Ho2O3）的溶液，溶液吸收峰波長為24113nm，278.10nm，287.18nm，333.44nm，345.47nm，361.31nm，416.28nm，451.30nm，485.29nm，536.64nm 和 64052nm。
儀器波長的允許誤差為：lnm在紫外光區，2nm在500nm左右。
2.吸光度的準確性。
可鑑別為重鉻酸鉀的硫酸溶液。 取基準重鉻酸鉀在120下乾燥至恒重約60mg，精密稱定，用0將005mol l硫酸溶液溶解並稀釋至1000ml，按規定波長測定並計算其吸收係數，與規定的吸收係數比較，應符合表中的規定。
3.雜散光的檢查。
可將下表所列試劑和濃度配製成水溶液，置於1cm石英吸收池中，在規定的波長下測定透射率，應符合表中的規定。
對溶劑的要求。
含有雜原子的有機溶劑通常具有很強的末端吸收。 因此，當用作溶劑時，它們不應在小於截止波長的範圍內使用。 例如，甲醇和乙醇的截止波長為205nm。 此外，當溶劑不純時，也可能增加干擾吸收。 因此，在測量測試樣品之前，需要檢查所用溶劑是否符合測試樣品所用波長附近的要求，即將溶劑置於1cm的石英吸收池中，以空氣為空白測定吸光度（即空白光路中不放置任何物質）。 溶劑和吸收池的吸光度在220 240nm範圍內不得超過040、在241 250nm範圍內，不得超過020.在251 300nm範圍內，不得超過010、300nm以上時，不應超過005。
測定。 測定時，除另有規定外，應採用用於配製供試品溶液的同一批溶劑作為空白對照，使用LCM的石英吸收池在規定的2nm吸收峰波長內測量若干點的吸光度，或儀器在規定波長附近自動掃瞄測量，檢查供試樣的吸收峰波長位置是否正確。 除另有規定外，品種下規定的吸收峰波長應在2nm以內，應以吸光度最高的波長為波長。 通常，供試品溶液的吸光度讀數取03～0.7. 儀器狹縫帶寬度應小於供試樣吸收帶半高寬度的1 10，否則測得的吸光度會很低; 狹縫寬度的選擇應基於以下事實：當狹縫寬度減小時，測試樣品的吸光度不會增加。 由於吸收池和溶劑本身可能存在空白吸收，因此應在確定供試樣的吸光度後減去空白讀數，或在計算含量前由儀器自動扣除空白讀數。
當溶液的pH值對測定結果有影響時，供試品溶液的pH值與對照品溶液的pH值應一致。
1.鑑定和檢驗應按照每個品種規定的方法進行。
2.含量測定一般有以下幾種方法。
1）對照品的比較法 照各品種項下的方法，分別配製供試品溶液和對照品溶液，供試品溶液中所含被測成分的量應為供試品溶液中測定成分規定量的100% 10%，所用溶劑也應完全一致， 測定供試品溶液與對照品溶液在規定波長處的吸光度後，按以下公式計算供試品中被測溶液的濃度：
cx = （ax/ar）cr
式中，cx為供試品溶液的濃度;
ax為供試品溶液的吸光度;
CR為對照品溶液的濃度;
AR是對照品溶液的吸光度。
2）吸收係數法 按各品種下的方法配製供試品溶液，測定其在規定波長處的吸光度，然後用該品種在規定條件下的吸收係數計算含量。用這種方法測量時，吸收係數通常應大於100，並應注意儀器的校準和檢定。
3）計算分光光度法 分光光度法的計算種類很多，應按各品種規定的方法進行使用。當在吸收曲線急劇上公升或下降的點測量吸光度時，波長的微小變化可能會對測量結果產生重大影響，因此參比樣品和測試樣品的測試條件應盡可能一致。 計算分光光度法通常不適用於含量測定。
4）比色法 供試品本身在紫外-可見光區沒有很強的吸收，或者雖然在紫外區有吸收，但為了避免干擾或提高靈敏度，可以加入適當的顯色劑，使反應產物的最大吸收向可見光區移動，這種測定方法稱為比色法。
用比色法測定時，由於顯色過程中影響顯色深度的因素很多，因此供試品應與對照品或標準品同時操作。 除另有說明外，比色法所用空白是指用相同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液，然後依次加入等量的相應試劑，以同樣的方式處理。 測定對照品與供試品溶液在規定波長下的吸光度後，按上述方法（1）計算供試品的濃度。
當吸光度與濃度的關係線性不好時，應取若梯度量的對照品溶液，用溶劑補充至相同體積，顯色後測定各溶液的吸光度，然後用吸光度和相應的濃度繪製標準曲線，然後根據供試品的吸光度在標準曲線上找到相應的濃度樣品，應獲得其含量。