CD80 Molecular (CD80) ELISA Kit 操作步驟

Mondo 健康 更新 2024-01-29

CD80 分子 (CD80) ELISA 試劑盒程式。

1.實驗原理。

本實驗採用ELISA雙抗體夾心法捕獲標準品或待測樣品中的CD80分子(CD80),通過HRP標記的CD80分子(CD80)進一步將CD80分子(CD80)特異性抗體與捕獲的CD80分子(CD80)結合,然後通過TMB底物顯色反應檢測450nm波長處的光密度值, 並計算CD80分子(CD80)濃度。

2.套件的組成。

1.微孔板:96 孔,包被有 CD80 分子 (CD80) 特異性抗體。

2.標準品:10 瓶不同濃度的 CD80 分子 (CD80) 標準品。

3.待檢測樣品:待檢測樣品為血清或組織勻漿等。

4.抗體工作溶液:HRP標記的CD80分子(CD80)特異性抗體。

5.TMB底物溶液:用於顯色反應。

6.終止液:用於終止顯色反應。

7.自來水:用於稀釋標準品、待測樣品和清洗板。

8.實驗裝置:酶標儀、移液器、封口膜、計時器等。

3. 步驟。

1.試劑和樣品的製備:按說明書要求配製標準品、待供試樣品、抗體工作液、TMB底物溶液、終止液等試劑。 同時,將待測樣品稀釋用於後續實驗。

2.分液:將標準品和待測樣品加入相應的孔中,每孔加入100公升。

3.孵育:輕輕密封微孔板,置於37°C一定時間,一般為1-2小時,期間不應有明顯晃動。

4.洗滌:用洗滌液洗滌盤子3-5次,每次洗滌後倒出液體,加入新的洗滌液,最後用自來水沖洗。

5.新增酶標準品:每孔加入100 l抗體工作液,確保樣品體積準確。

6.孵育:輕輕密封微孔板,再次置於37°C一定時間,一般為1-2小時,期間不應有明顯晃動。

7.洗滌:與步驟4相同。

8.新增底物溶液:每孔新增 100 L TMB 底物溶液。

9.孵育:輕輕密封微孔板,在37°C放置一定時間,一般為15-30分鐘,期間不應有明顯晃動。

10.終止反應:每孔加入 100 l 終止溶液並輕輕混合。

11.檢測:用酶標儀在450nm波長處測定各孔的光密度值,並記錄資料。

4.結果的計算和分析。

根據測得的光密度值,用標準濃度和光密度值繪製標準曲線,根據標準曲線求待測樣品的CD80分子(CD80)濃度。 最後,對資料進行統計分析並得出結論。

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