隨著非洲豬瘟病毒傳入我國,病毒多樣化,低毒力毒株比例不斷上公升,僅憑臨床症狀難以及早發現。 生物安全措施,結合病原體檢測和抗體監測,是預防和控制非鼠疫的最有效手段。
有必要明確非鼠疫病毒病原體檢測和抗體檢測的視窗期,以防控非鼠疫病毒。
來自德國的科學家Jutta Pikalo運用了多種方法對感染非洲豬瘟的實驗動物進行診斷,從研究結果中不難發現,在非洲豬瘟預警中,臨床症狀診斷、病原體檢測和抗體檢測三種方法存在明顯差距。 研究結果已習並分享如下:
1.實驗方案
2、臨床症狀:
接種後的所有動物第4天非特異性臨床症狀,如抑鬱,厭食,不願站立,活動能力下降,震顫,發紅,耳鼻發紺,駝背,呼吸困難開始;
感染後第4天發熱開始,在感染後第8-9天達到高峰,在感染後第7-8天達到高峰(圖1),但在3號動物中沒有觀察到體溫公升高。
圖1 實驗動物體溫曲線3. 病原體檢測
感染後3天3頭豬感染後7 d檢出非瘟疫病毒,其他豬檢出非瘟疫病毒,而耳標3豬感染後第10 d檢出非瘟疫病原體;
在感染後第7-14天,病毒載量達到最大值129×10 3-6.8 10 4個反應拷貝(結果見表)。
表1 感染後0-18dpi動物血液實時螢光定量PCR結果
注意:ND表示未檢測到,NA表示沒有感興趣的病原體,數值表示每個PCR反應(5L)檢測到的基因組拷貝數,顏色強度表示病毒載量的相對水平(顏色越深表示病毒載量越高,從淡黃色到深紅色)。
表2 實驗動物安樂死當天血液、血清、組織樣本實時螢光定量PCR結果
注意:ND表示未檢測到,數值表示每個PCR反應(5 L)檢測到的基因組拷貝數,顏色強度表示病毒載量的相對水平(顏色越深表示病毒載量越高,從淡黃色到深紅色)。
4. 抗體檢測
Ingenasa ELISA 試劑盒(檢測 p72 抗體):感染後第10天,2頭豬抗體陽性,3頭豬可疑(圖2);
IDVET競相ELISA試劑盒(檢測p32抗體):感染後10天所有抗體轉為陽性,其中1例感染後第7天抗體可疑;
IDVET 間接 ELISA 試劑盒:感染後第 10 天,3 例可疑,1 例陰性,1 例陽性。感染後第14天,疑似豬和陰性豬抗體均轉為陽性
間接免疫辣根過氧化物酶測定:感染後第7天,血清半定量結果發生變化,感染後第18天存活動物的抗體滴度範圍為2560-5120(半定量結果)。
圖2 使用Ingenasa ELISA產品檢測實驗動物血清轉化 注:ELISA的臨界值為50%,用虛線表示。 總結:
實驗動物在感染後第4天表現出臨床症狀,qPCR在第3天檢測到病原體,在ELISA中檢測到感染後第7天檢測到抗體。 觀木觀點:
非洲豬瘟減毒株的防控需要全面公升級檢測系統,確保在病毒大規模傳播之前及早發現並及時清除
篩選高靈敏度、穩定性好的四通道螢光PCR儀器。
篩選靈敏度高、抗干擾能力強、核酸提取純度高、抗汙染能力強的核酸提取試劑盒及配套核酸提取試劑盒。
使用內標監測篩選雙靶點螢光PCR試劑,以提高檢測靈敏度和準確性。
加強對人、車、物的檢測,防止病毒進入。
異常豬收集口鼻和血液拭子qPCR以檢測病原體。
定期採集EDTA抗凝血qPCR監測病原菌,ELISA監測抗體。
發現並篩查感染,並快速準確地將其清除。
參考文獻: Pikalo J, Schoder M E, Sehl-Ewert J, et al towards efficient early warning: pathobiology of african swine fever virus “belgium 2018/1” in domestic pigs of different age classes[j]. animals, 2021, 11(9): 2602.