ELISA實驗方案和注意事項

Mondo 健康 更新 2024-01-30

二辛可酸(Bicinchonic Acid,BCA)是國際上用蛋白質濃度測試對BCA進行的基本改進,其原理與Lowery蛋白質定量相似,即將鹼性環境蛋白質複合物與Cu2+與Cu2+絡合,Cu2+與兩種BCAs和Cu+螯合,穩定紫藍色複合物。

蛋白質的定量分析是臨床上疾病診斷和檢查的重要指標,也是許多生物製品、藥品和食品質量檢測的重要指標。 在生化實驗中,準確可靠地定量樣品中的蛋白質是一項非常重要的任務,經常執行。 一人為研究生入學考試加油

蛋白質濃度測定的方法有很多,但每種方法都有自己的特點和侷限性,因此有必要在了解各種方法的基礎上,根據不同的情況選擇合適的方法,以滿足不同的要求。 例如,凱氏定氮是準確的,但操作複雜,不適合測試大批量樣品Lowry方法更準確,但更耗時,每一步的時間要求都比較嚴格布拉德福德法靈敏簡單,但易受洗滌劑影響;BCA法以其試劑穩定、抗干擾能力強、結果穩定、靈敏度高而廣受歡迎。

常用方法。 其原理是蛋白質中含有酪氨酸的酚基,能與苯酚試劑中的磷鉬-鎢酸反應生成藍色化合物,其吸收波長為750nm,蛋白質含量與750nm的吸光度成正比。

其原理是,在鹼性環境中,雞蛋自身分子中的肽鏈結構可以與Cu2+絡合,使Cu2+還原為Cu+。 BCA試劑與Cu+敏感且特異性地結合,形成穩定的有色絡合物。 在562nm處有很高的光吸收值,顏色的深度與蛋白質濃度成正比。 通過製備一組經過連續稀釋和濃度抑制的蛋白質。

然後用待測蛋白質濃度未知的儀器測試標準品,並根據繪製的標準曲線計算樣品中的蛋白質濃度。

它是一種利用蛋白質染料結合原理定量測定痕量蛋白濃度的快速靈敏方法。 考馬斯亮藍G250,游離狀態下為紅色,488nm處的光吸收;在酸性溶液中,當它與蛋白質結合時,它會變成青色,並且蛋白質-色素偶聯物在 595 nm 的波長下具有光吸收。 在一定範圍內,其光吸收值與蛋白質含量成正比。

受蛋白質中酪氨酸和色氨酸殘基的影響,蛋白質溶液在280nm附近具有很強的吸收能力。 如果將核酸混合在蛋白溶液中,對測量結果影響很大,核酸吸收峰為260nm。 因此,同時測量280nm和260nm波長的吸光度,通過計算蛋白質含量更正確。

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