中華人民共和國供銷合作行業標準
gh/t 1386-2022
果蔬食品中葉黃素、玉公尺黃質、隱黃質和胡蘿蔔素的測定
determination of luteinzeaxanthincryptoxanthin and carotene in food from fruits and vegetables
前言
本檔案符合GB T 11-2020《標準化工作指南第1部分：標準化檔案的結構和起草規則》。
請注意，本文件的某些內容可能與專利有關。 本檔案的發布者不承擔識別專利的責任。
本檔案由中華全國供銷合作社聯合會提出。
本檔案由全國水果標準化技術委員會貯藏和加工分技術委員會（SAC TC 501 SC 1）監督。
本檔案起草單位：江蘇省農業科學院、中華全國供銷社聯合會南京野生植物綜合利用研究所、興化聯富食品、江蘇愛蘭德營養、小馬檢測集團、江蘇省蔬菜加工技術研究開發專業分中心、江蘇省果蔬產業技術創新戰略聯盟、 安徽省科學技術研究院、丹東市農業農村發展服務中心、江蘇石浦檢測服務中心
本檔案主要起草人：李大京、王松軍、戴竹清、張鳳倫、石祖豪、張忠元、張興、劉慶正、何薇薇、肖亞東、塗琦、張國棟、聶美梅、姚正英、張曉紅、劉慶榮、徐淑文、劉玉軍、王曉東、馬海霞。
範圍
本檔案規定了測定果蔬食品中葉黃素、玉公尺黃質、α-隱黃質、-隱黃質、α-胡蘿蔔素和-胡蘿蔔素的高效液相色譜法。
本檔案適用於含有類胡蘿蔔素的果蔬原料和加工產品。
規範性參考文獻
本檔案中沒有規範性參考。
術語和定義
本文件中沒有需要定義的術語和定義。
原則
供試品採用正己烷-乙醇-丙酮-甲苯絡合物提取，氫氧化鉀-甲醇溶液皂化，使葉黃素、玉公尺黃質、α-隱黃質、α-胡蘿蔔素、胡蘿蔔素-胡蘿蔔素-胡蘿蔔素釋放成游離狀態，用正己烷萃取並減壓濃縮，再用高效液相色譜法測定，外標法定量。
試劑、材料和裝置
5.1 試劑。
甲基叔丁基醚[CH30C（CH3）3，MTBE]：色譜純。
5.1.2甲醇（CH4O）：色譜純。
5.1.3 二氯甲烷（CH2Cl2）：色譜純。
5.1.4正己烷（C6H14）：色譜純。
5.1.5 雙蒸水（H2O）：一級水。
5.1.6 無水乙醇（C2H6O）：分析純。
5.1.7丙酮（C3H6O）：分析純。
5.1.8甲苯（C7H8）：分析純。
5.1.9 無水硫酸鈉（Na2S04）：分析純。
5.1.10 氫氧化鉀 （K0H）：分析純。
5.1.11 抗壞血酸（C6H8O6）：分析純。
5.1.12 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（C15H24O，BHT）：分析純。
5.2 標準。
5.2.1 葉黃素（C40H56O2）：純度大於等於95%的標準物質或標準樣品，或國家認證和分標準物質證書。
5.2.2.玉公尺黃質（C40H56O2）：純度大於或等於95%的標準物質或標準樣品，或經國家認證並授予標準物質證書的標準物質或標準樣品。
5.2.3 A-隱黃質（C40H56O）：純度大於或等於95%的標準物質或對照品，或國家認證和分標準物質證書。
5.2.4-隱黃質（C40H56O）：純度大於或等於95%的標準物質或對照品，或經國家認證並頒發標準物質證書的對照品或標準品。
5.2.5 A-胡蘿蔔素（C40H56）：純度大於或等於95%，或經國家認證並頒發標準物質證書的對照品或對照品。
5.2.6-胡蘿蔔素（C40H56）：純度大於等於95%的標準物質或對照品，或經國家認證並取得標準物質證書的對照品或對照品。
5.3 儀器裝置。
5.3.1.高效液相色譜儀：配備紫外檢測器、二極體陣列檢測器。
5.3.2.分析天平：電感0001 g 和感性 0 00001 g。
5.3.3 超聲波清洗機。
5.3.4 旋轉蒸發器。
5.3.5.吹氮儀。
5.3.6 渦旋儀。
5.3.7.分光光度計。
5.3.8 恆溫培養箱。
5.4 材料。
微孔膜：045 m，有機教師。
分析步驟
6.1 一般要求。
所有分析操作均應在避光室內進行。
6.2 試樣製備。
6.2.1 原材料樣品。
果蔬原料樣品研磨、製漿，得均勻溶液，在0 4條件下可貯存1天。
6.2.2 實心試樣。
由果蔬幹製品和果蔬提取物製成的固體樣品，如片劑糖果、膠囊、粉末和其他固體樣品，經粉碎、研磨和篩分（孔徑小於0.）。5 mm），得到固體粉末狀試樣，在0 4條件下可儲存1周。
6.2.3.液體樣品。
水果和蔬菜汁等液體標本不需要處理。
6.3.試劑製備。
6.3.1 標準儲備溶液 （500 g ml）：準確稱取 5 mg 全反式葉黃素或玉公尺黃質或 α-隱黃質或 α-胡蘿蔔素或胡蘿蔔素標準品（精確至 0.）。01 mg），加入25 mg BHT，轉移至10 ml棕色容量瓶中，用二氯甲烷稀釋並固定於刻度上，製成質量濃度為500 g ml的標準儲備液，避光儲存在-20 ml中3個月。標準儲備溶液在使用前應根據附錄 A 校準濃度。
6.3.1 標準中間溶液（100 g ml）：準確移液。 上述標準儲備溶液 （6.）3.1) 1.0ml置5ml棕色容量瓶中，用二氯甲烷定容至刻度，搖勻，配製成質量濃度為100ml的標準中間液，避光儲存4次，保質期為1周。 標準中間溶液使用前應按附錄A進行校準。
6.3.2.標準系列溶液：將上述標準中間液分別移液（63.2) 0.0 ml、0.05 ml、0.1 ml、0.2 ml、0.3ml、0.4ml、1.0 ml在10 ml棕色容量瓶中，用流動相稀釋並製備至濃度範圍為00 μg/ml~10.0 mL 標準系列溶液。 臨時使用。
6.3.3 正己烷-乙醇-丙酮-甲苯提取物：準確移液正己烷 100毫公升，乙醇60毫公升，丙酮70 ml、
甲苯 70ml混勻於棕色研磨瓶中，得正己烷-乙醇-丙酮-甲苯提取物，體積比為10∶6∶7∶7。
6.3.4 氫氧化鉀-甲醇溶液：稱取40g氫氧化鉀置研磨瓶中，加甲醇溶液100ml，攪拌均勻，得40%氫氧化鉀-甲醇溶液。
6.4.提取和皂化。
準確稱量 1 g 至 5 g（精確到 0.）。001 g） 試樣，加入 10g抗壞血酸，置於100ml研磨錐形瓶中，加入30ml正己烷-乙醇-丙酮-甲苯提取物（63.4）、蓋上軟木塞，搖勻提取3 h 4 h，避免沉澱。在提取結束時，加入 2 ml 40% 氫氧化鉀 - 甲醇溶液 （6.）3.5）搖勻，置於避光處，皂化16 h，25次，即得皂化液。
6.5 提取。
將皂化溶液轉移到250ml分離漏斗中，加入30ml正己烷，關閉軟木塞，在室溫下**1分鐘然後加10%硫酸鈉溶液38ml，搖勻，靜置分層，收集有機層溶液：按上述方法第二次萃取水相，合併有機相溶液。 將有機相在40°C壓力下在旋轉蒸發器上濃縮至1ml 2ml，然後用氮氣乾燥。 正好加入 60ml甲醇溶液，完全溶解，0將 45 m 有機中膜過濾收集到小瓶中以備後用。
6.6色譜法測定。
6.6.1 色譜條件。
色譜條件如下：
a） 該列是：c30反向列，列長度250 mm內徑4.6 mm顆粒大小um；或等效列;
b） 流動相A、水、甲基叔丁基醚、甲醇體積比為5：25：70;流動相B、水、甲基叔丁基醚和甲醇的體積比為5：85：10;
c） 洗脫梯度按表1進行;
d） 流量為 06 ml/min；
e） 檢測波長為 450 nm
f） 柱溫為25;
g） 進樣體積為 20 L。
6.6.2.標準曲線繪製。
葉黃素、玉公尺黃質、a-隱黃質、-隱黃質、a-胡蘿蔔素、-胡蘿蔔素標準系列溶液（6 3.3）注入高效液相色譜儀中，得峰面積，以峰面積為縱坐標，以標準品系列溶液的濃度為橫坐標，繪製標準曲線。
6.6.3.試樣測定。
待測試溶液（65）注入高效液相色譜儀，得峰面積，照標準曲線得供試品溶液中葉黃素、玉公尺黃質、α-隱黃質、α-胡蘿蔔素、-胡蘿蔔素的濃度。以玉公尺汁為例的樣品的HPLC見附錄B。
資料處理
按質量分數計算樣品中葉黃素、玉公尺黃質、a-隱黃質、a-隱黃質、a-胡蘿蔔素和-胡蘿蔔素的含量，按公式（1）計算。 計算結果表示為在重複性條件下獲得的三個獨立測量結果的算術平均值，並保留三個有效數字。
式中：x——樣品中葉黃素、玉公尺黃質、a-隱黃質、-隱黃質、a-胡蘿蔔素、-胡蘿蔔素的含量，單位為毫克/千克（mg kg）;
c——從標準曲線上找到的樣品溶液中葉黃素、玉公尺黃質、a-隱黃質、a-胡蘿蔔素和胡蘿蔔素的濃度，單位為微克/毫公升（g ml）;
v – 旋轉蒸發後復溶溶液的體積，單位為毫公升 （ml）;
m - 試樣的質量，單位為克（g）;
n – 超過線性範圍後需要進一步稀釋的因子。
精度
在重複條件下獲得的三個獨立測量結果的絕對差異不得超過算術平均值的 10%。
檢測限
葉黃素、a-胡蘿蔔素和胡蘿蔔素的檢出限均為5 g kg玉公尺黃質、a-隱黃質和-隱黃質溶液的檢出限均為20 g kg。 30 min內可分離檢測20多種胡蘿蔔素，分離度大於14；峰值**率為95%100%。
*從：