概述
近年來，3D球狀體和腫瘤類器官模型在大型化合物庫中的高通量藥物篩選和單藥或多藥濃度檢測中的應用已經證明了幫助研究人員快速篩選藥物適應症的能力，具有較強的藥物敏感性、良好的反應性和優異的效果。 在2D細胞藥敏活性的檢測中，CCK8法被廣泛使用，但在3D腫瘤球狀體和腫瘤藥敏活性方面，ATP螢光法比CCK8法更準確。
ATP生物發光技術原理
該試劑盒採用生物發光法，利用螢火蟲螢光素酶催化底物螢光素的轉化，有效利用ATP的能量發射光子。 發光訊號與ATP的量成正比，ATP與類器官中存在的細胞數量成正比，可以有效檢測3D球體和類器官的活性。
該試劑盒專為多孔板設計，是自動高通量篩選 （HTS）、3D 球狀體和類器官增殖以及毒性分析的理想選擇。 均質化測定步驟包括將單一試劑直接新增到含有類器官培養基的板中無需移除基質膠
均質化試驗"點膠-混合-測試"該協議使得3D球狀體和類器官裂解以及由此產生的發光訊號與存在的ATP量成正比，ATP與類器官中的細胞數量成正比。 獨特的同質檢測方案避免了需要多個步驟的ATP檢測方法可能引入的錯誤。
產品組成
注意：建議立即使用該產品
特徵：
簡化的類器官活性檢測：同質"點膠-混合-測試"該協議減少了其他類似測試所需的步驟數;
類器官的使用量較少：準確檢測低於常用比色法和螢光法檢測閾值的細胞數量。 減少每次測定反應所需的細胞數量;
快速獲得結果：加入試劑10min即可獲得資料;
您可以選擇自己的測試協議：可用於多種型別的多孔板操作。 資料可以用發光探測器或CCD成像裝置記錄;
板材可連續加工：發光訊號穩定，樣品可分批處理。
如何使用：
1.類器官的製備：
使用適合化學發光檢測的孔板（底部和蓋子是透明的，孔壁是不透水的，推薦專案編號：ABS7242）。，每孔接種5ul-10ul類器官基質膠懸浮液，放入培養箱中半小時以上，凝固後加入100ul類器官培養基（如果使用 384 孔板，則每孔接種 2 個。5 L-4 L類器官基質膠懸浮液，取決於384孔板的型別）。並確保每孔的細胞數在測定中10,000臺以內（如果使用384孔板，則應控制在10,000以內）。同時，建立不含類器官的基質膠培養基的孔陰性對照按照常規的類器官培養方法培養類器官。 如有必要，可以新增藥物治療的類器官。 此外，如有必要，也可以設定類器官的濃度梯度，以便稍後確定試劑盒的有效性。
2.試劑製備：
將 1 管凍乾粉加入 1 管 10ml 緩衝液中，充分混合並避光備用。
注意：溶解後盡快使用，-80，避光儲存，有效期乙個月。
1） 必要時溶解類器官ATP發光檢測試劑配藥試劑;
2）按96孔板每孔100 L（384孔板每孔25 L）的量，取類器官ATP發光檢測試劑適量，平衡至室溫。
3.類器官活力檢測：
1）取出類器官培養板，在室溫下平衡10分鐘（通常不應超過30min）。
2） 將類器官培養基放入 96 孔板的每個孔中免職，新增到每個孔中100μl類器官ATP發光檢測試劑（384 孔板：每孔 25 L注意：無需移除基質。
3） 室溫熱烈的振盪（微孔板恆溫振盪器，推薦目錄號：ABS72034）5min類器官被耗盡和溶解;
4）室溫（約25）孵育。min穩定發光訊號;
5） 使用化學發光檢測功能多功能酶標儀進行化學發光檢測。 請根據儀器要求設定相應的引數，每孔檢測時間一般為025-1s以上，視儀器檢測靈敏度而定，需適當調整;
6）直接從化學發光讀數計算類器官的相對活力，或從ATP標準曲線計算ATP的量，以計算類器官的相對活力。
注意：檢測效果因類器官型別而異，對於一些ATP含量特別高的類器官，細胞數達到50,000後可能存在非線性相關性，但化學發光讀數會繼續增加。
常見問題解答
螢光素酶的活性對溫度敏感，所以在反應之前類器官和檢測試劑都需要平衡至室溫稍後進行測定。 檢測試劑在使用前應充分混合;
2.本試劑盒檢測試劑中含有螢光素酶反覆的凍融迴圈可導致逐漸失活。 為了達到良好的使用效果，第一次溶解後可以適當以等分試樣儲存但是，應該注意的是，容器不應被ATP汙染;
3.被測藥物的溶劑較高的水平可能會干擾螢光素酶反應從而影響化學發光訊號。 這可以通過設定來完成控制含有溶劑的類器官培養基，消除溶劑干擾;
4.該測試必須適合類器官培養白色或黑色 96 孔板或 384 孔板。 如果使用普通透明 96 孔板或 384 孔板相鄰的孔會相互干擾;
5.類器官接種密度，以24遍96孔板為例。
傳代前狀態：24孔板，每孔25μl基質膠類器官團聚體，500μl培養基。
通過率：類器官 1：2 傳代。
接種方法：24 孔板至 96 孔板。
接種井要求：每孔5μl基質膠類器官團聚體，100μl培養基。
接種孔數：24孔板收集3孔類器官傳代，按1：2傳代的比例通過6孔，每孔分液25ul，總分液量為6*25=150ul，此時輸送到96孔板，分液量為每孔5ul，總孔數為150 5=30孔。
圖ICC（膽管癌）類器官96孔鋪板密度圖。
檢測案例
1.類器官藥物敏感性——人肝膽癌（icc)
結論：人肝膽管癌（ICC）類器官對奧沙利鉑、侖伐替尼、拉羅替尼和瑞戈非尼不敏感。 對順鉑、紫杉醇敏感。
2.類器官藥物敏感性-人肺癌
結論：人肺癌類器官通常對藥物敏感1。 對藥物敏感2.
3. 類器官藥物敏感性——人胰腺癌
結論：人胰腺癌類器官通常對伊立替康和奧沙利鉑敏感。 對紫杉醇和吉西他濱敏感; 兩名患者的抗菌藥物敏感性一致。
4. 類器官的抗菌敏感性——人類胰腺癌
結論：人胰腺癌類器官通常對拉羅替尼、奧克拉替尼、侖伐替尼和5-氟尿嘧啶敏感。 兩名患者的抗菌藥物敏感性一致。