HEK293細胞的懸浮培養和轉染作為最有效的真核表達系統之一，是重組抗體和其他重組蛋白瞬時表達的重要手段。 近10年來，HEK293表達體系已成功實現6000多種重組蛋白（含抗體）的表達，HEK293瞬時轉染無血清培養基用量已超過20萬公升。 近年來，隨著結構生物學和生物大分子藥物研究的快速發展，對HEK293瞬時表達系統的需求也在不斷增加。 今天，我們整理了一些HEK293懸浮培養和轉染的經驗，與大家分享。
1.細胞系的選擇
HEK293細胞的常見細胞系有HEK293F、HEK293E、HEK293T、HEK293FT、HEK293H和HEK293SHEK293F是最常用的細胞系型別，用於懸浮培養和目標蛋白的瞬時轉染。
2.介質的選擇
HEK293細胞通常用於懸浮培養無血清培養基執行，由於使用過程中不新增血清，成本相對較低，可以避免血清來源的汙染和血清**和批次的不穩定引起的實驗生產批次變化。
3.栽培所需的裝置條件
HEK293細胞懸浮培養可分為搖瓶培養和生物反應器培養兩種方法。 搖瓶培養所需的裝置包括：生物安全櫃、恆溫水浴、離心機、細胞計數儀、CO2、恆溫搖床、-80 冰箱、液氮罐、冷凍箱、冷凍管、三角形（或肖特瓶）。
4.栽培條件
當HEK293電池保持懸浮狀態時，CO2恆溫振盪器條件為：365-37、5%-8%CO2，振動台的速度會根據振動台的軸距和使用的容器的不同而有很大差異，可根據實際使用情況進行調整，35公釐軸距振動台的推薦轉速為150-175轉/分，50公釐軸距振動台的推薦轉速為100-110轉/分。 生物反應器的培養條件為：365-37,40%溶解氧，pH值：71.速度：80 100 rpm。
5.細胞的馴化
在HEK293細胞的懸浮培養過程中，如果需要改變所用培養基的型別或品牌，一般需要對培養基進行調整。 馴化的方法分為直接馴化和間接馴化兩種。 直接馴化是將處於對數生長期的生長良好的細胞直接稀釋成一種新的培養基進行正常培養，即用於直接馴化的馴化培養基是用於替代的培養基。 間接馴化與直接馴化相似，但所用馴化介質是與原介質和替代介質按不同比例混合的混合介質，原介質與替代介質的混合比例從高到低依次為75：25、50：50、25：75、10：90、0：100。 在馴化過程中，首先培養原始培養基比例高的混合培養基，然後逐漸降低原始培養基的比例，直到100%的培養物與替代培養基一起使用。 一般建議先直接馴化，當直接馴化不成功時，間接馴化不成功。
6.細胞復甦。
細胞的初始密度應略高於正常傳代的初始密度，用於回收的培養基最好是細胞冷凍儲存前用於擴增培養的培養基。 在復甦過程中，先將冷凍儲存管置於37水浴中，輕輕搖動解凍細胞（時間控制在1分鐘以內），細胞解凍後，用移液管將其轉移到三角形燒瓶或離心管中，37預熱培養基（開始時逐滴加入， 然後可以提高新增速度），搖勻，置於CO2恆溫振盪器中培養。由於冷凍儲存溶液中DMSO對細胞的毒性，一些培養基在解凍過程中需要離心以從冷凍儲存中去除DMSO，而另一些則不需要。
7.細胞的冷凍儲存
對於處於對數生長期（通常在傳代後第 3 天）且細胞活力為 >90% 的冷凍儲存細胞，必須選擇 HEK293 細胞。 根據所用無血清培養基的品牌不同，凍存液的製備方法也各不相同，一般有兩種常見的製備形式：10%DMSO+90%新鮮無血清培養基; 7.5% dmso + 46.25% 新鮮無血清培養基 + 4625%條件的無血清培養基（和離心的細胞培養上清液）。
8.細胞瞬時轉染
PEI 轉染廣泛用於 HEK293 懸浮細胞的轉染。 PEI雖然對細胞有一定的毒性，但基本可以滿足轉染的效率要求，轉染成本低。