一、蛋白質基本資訊：
CNTN1（ContactIn 1，也稱為F3蛋白）是屬於Ig超家族的細胞粘附分子。 由於其特定的細胞粘附功能，它在多種生理和病理過程中起著重要作用，例如生成。
CNTN1蛋白的主要特徵如下：
1.分子量：約130 kDa。
2.結構特點：含有多個Ig樣C2型結構域和豐富的醣基化修飾。
3.表達模式：廣泛表達於中樞神經系統、周圍神經系統等組織。
4.功能：通過與其他蛋白質（如 Caspr、NRCAM 和 Notch1）結合來調節生理過程，例如細胞間相互作用、細胞極性和胚胎發育。
5.貨號聚甲醯胺1000-6948
2、實驗設計：
1.基因轉殖：
a.根據CNTN1基因序列設計引物，RT-PCR擴增CNTN1 cDNA。
b.將 CNTN1 cDNA 插入融合表達載體中，例如 PET-28A（+）。
c.通過酶切鑑定和測序驗證正確的轉殖。
2.重組蛋白表達：
a.將融合載體轉化為表達大腸桿菌的宿主，如BL21（DE3）。
b.IPTG誘導蛋白表達，收集細菌表達產物。
3.細胞裂解和分離：
a.將細菌沉積物重懸於含有適量牛白蛋白、酶抑制劑和洗滌緩衝液的裂解物中。
b.細菌裂解後，通過離心分離可溶性CNTN1重組蛋白。
4.親和純化：
a.CNTN1 重組蛋白與親和樹脂（如鎳-NTA 親和樹脂）親和結合。
b.洗脫緩衝液用於洗脫與親和填料結合的重組蛋白。
c.洗脫和濃縮後，得到純化的CNTN1重組蛋白。
5.蛋白質鑑定和定量：
a.採用SDS-PAGE和Western blot分析純化蛋白樣品的純度和分子量。
b.使用BCA或Bradford方法測定CNTN1重組蛋白的濃度。
6.測試蛋白功能：
a.使用細胞培養和轉染技術將 CNTN1 重組蛋白新增到細胞培養基中。
b.通過細胞粘附和遷移試驗評估CNTN1重組蛋白對細胞（如神經元和癌細胞）粘附和遷移能力的影響。
c.使用細胞粘附和遷移指標（如細胞數、細胞膜形態和跨孔遷移測定）進行定量分析。