工具:mRNA標準品應用案例

Mondo 科技 更新 2024-02-05

背景:

新型冠狀病毒mRNA疫苗的成功研發,為mRNA技術帶來了前所未有的關注。 mRNA技術作為一種通用技術,有望廣泛應用於傳染病疫苗、腫瘤疫苗、免疫、蛋白替代、性抗體等多個領域,引領醫藥研發進入新時代。

工具mRNA在核酸藥物遞送系統的研究、蛋白表達的療效研究、mRNA藥物的開發中起著非常重要的作用。

什麼是工具mRNA?

工具mRNA(mRNA標準品)是成品的標準信使RNA(類似於分子實驗中常用的質粒)。 mRNA標準品購買後無需處理,可直接應用於相應的實驗。

ABS 具有一系列線性、環狀工具 mRNA。 其中,線性mRNA採用化學化學合成的CAP1帽結構,使線性mRNA具有較高比例的天然帽結構,有5個修飾鹼基(N1-甲基假-UTP、偽UTP、5-甲氧基-UTP、5-甲基-CTP、N6-甲基-ATP),優化了適合哺乳動物細胞的密碼子、UTR、polya結構。 通過體外轉錄生成環狀mRNA,然後分離純化,得到成品。

工具mRNA分類:

1. 報告基因基因組學

報告基因 mRNA 通常用於細胞轉染、翻譯效率、藥物遞送、體內成像等。 其中,Ebison EGFP mRNA是最常用的示蹤蛋白mRNA之一,具有較強的螢光穩定性,用於表達增強的綠色螢光蛋白(從水母中分離出來),發射波長為509nm,可通過螢光顯微鏡或流式細胞術檢測,是觀察mRNA遞送和翻譯的理想工具。

EGFP mRNA瓊脂糖電泳條圖。

圖 EGFP mRNA轉染24小時後HEK293細胞的表達效應。

ABS還擁有TDTOMATO mRNA、YFP mRNA、mBanana mRNA等螢光蛋白mRNA等報告基因工具,可用於對照驗證實驗,如需隨時聯絡我們。

2. 基因編輯

CRISPR Cas9是一種先進的基因編輯系統,廣泛應用於多種疾病。 Cas9 mRNA 在細胞內瞬時表達 Cas9 蛋白,降低免疫反應和脫靶的風險。

3. 免疫抗原

免疫抗原樣mRNA是腫瘤免疫的理想研究工具**。 卵清蛋白 (OVA) 是絲狀蛋白超家族的成員,是蛋清中發現的主要醣蛋白。 它是免疫學和生化研究的常用抗原,是一種成熟的氣道高反應性模型過敏原,可啟用細胞和體液免疫。

4. 蛋白質替代

EPO mRNA 用於表達人促紅細胞生成素。 我們在體外使用 (ABS CaptM) 轉錄製備了 EPO mRNA,化學合成的 Cap1 結構使其具有高比例的天然 mRNA 帽結構,從而實現了高效表達。

工具mrna產品特點:

工具mrna好處:

1.CAP1帽結構,提高mRNA穩定性和翻譯效率,更適合哺乳動物;

可選擇多種修飾,新增修飾鹼基可提高翻譯效率,降低免疫原性;

3、適當的polya尾部結構,保證mRNA的穩定性和翻譯效率;

4.完整性高,質量控制嚴格,便於研究和應用。

使用者實驗案例1:

用核酸轉染試劑盒(ABS60259)將mCherry mRNA轉染到HEK293細胞中24 h和48 h,螢光顯微鏡下觀察到的紅色螢光穩定,訊號強。 (具體實驗操作請參考核酸轉染試劑盒(ABS60259)的實驗操作步驟)。

圖:轉染mCherry mRNA24小時後的螢光。

圖 mcherry mRNA轉染48小時後的螢光。

使用者實驗示例

採用mRNA轉染試劑(ABS60339)轉染不同型別細胞中的線*** mRNA-egfp mRNA,對細胞進行24 h處理,螢光顯微鏡拍照,各類細胞均呈現強烈的綠色螢光。

圖:將EGFP mRNA轉染到不同的細胞型別中。

使用者實驗示例

將線性螢光素酶mRNA注射到活小鼠體內,小鼠稱重150ug,每針注射20ul,共注射3次,3天後進行體內顯像。

圖 小鼠成像後將螢光素酶mRNA注射到體內mRA中。

faq:

工具mRNA儲存條件是什麼?

答:需貯存於-40°C、-80冰箱或液氮以下貯存,艾普信提供的產品皆為新鮮出品,為達到最佳使用效果,請於收到商品後2個月內使用完畢。 如果您不小心將 mRNA 在 -20 下儲存了一小段時間(例如 1 天),您可以在瓊脂糖凝膠電泳上執行 mRNA,以檢視其在實驗前是否降解。

工具先生na狀態如何?

答:我們的工具mRNA是液態的,一般溶劑一般是1mm檸檬酸鈉鹽溶液,pH值為64。

工具 mRNA交貨時間是多長時間?

答: 我們公司的工具mRNA都是新鮮生產的產品,我們將在收到訂單後立即安排生產和交貨。 一般交貨時間為1-2周。

4. 工具mRNA的純度是多少?

答:線性mRNA純度可達90%; 如果環狀mRNA長度為3-5K,則可以達到科學級純度,通常為85%純度。 環狀mRNA序列越長,閉環效率越低,純化難度越大。

5. 工具 Mrna推薦的瓶蓋結構是什麼?

a:cap1 ag。封頂率高達95%。

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