介紹:
CD3D重組蛋白是一種重組蛋白,用於研究和開發與免疫系統相關的疾病。 在本文中,我們將詳細介紹CD3D重組蛋白實驗的設計和基本資訊。
CD3D重組蛋白的基本資訊:
常用中文名:CD3D recombinant protein.
亞型:免疫球蛋白超家族蛋白。
基因名: CD3D
基因 ID: 11185
外顯子數量:6
分子量:約2.6萬道爾頓。
基因本體:CD3 基因家族是 T 細胞受體複合物的組成部分。
貨號聚氧乙烯PA1000-5920
參考資料: Schwartz Rh 1990. science. 248(4961):1349-1356.
實驗設計:1轉殖CD3D基因:
a.獲取CD3D基因的DNA序列。
b.將CD3D基因轉殖到適當的表達載體中,例如PET-28A(+)。
c.確定轉殖的CD3D基因序列是否正確。
2.重組蛋白表達:
a.轉化能力強的大腸桿菌(例如,BL21(DE3))。
b.將菌落在LB培養基中培養,並加入適當的抗生素(例如卡那黴素)進行選擇。
c.異丙基-D-硫代半乳糖苷 (IPTG) 的新增誘導 CD3D 蛋白的表達。
d.收集細菌溶液並離心。
3.蛋白質純化:
a.使用細胞破碎溶液提取CD3D蛋白。
b.應用親和純化方法,例如使用His標籤純化,使用鎳柱。
c.對純化的蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳,以驗證蛋白質的純度和大小。
4.蛋白質結構鑑定:
a.使用質譜(例如質譜)和蛋白質印跡方法鑑定 CD3D 重組蛋白。
b.進行N端序列測定和質譜分析,以確定蛋白質序列和分子量。
c.可選地,使用圓二色光譜研究蛋白質的二級結構。
5.功能資格:
a.進行體外細胞實驗,如淋巴細胞活化試驗,以檢測CD3D重組蛋白的生物活性。
b.進行動物模型實驗以評估CD3D重組蛋白在小鼠實驗中的功能和全身作用。
通過上述步驟,我們能夠成功合成和表徵CD3D重組蛋白,以進一步研究其生物學功能和潛在的臨床應用。