CD3d重組蛋白的製備和表徵

Mondo 科學 更新 2024-02-20

介紹:

CD3D重組蛋白是一種重組蛋白,用於研究和開發與免疫系統相關的疾病。 在本文中,我們將詳細介紹CD3D重組蛋白實驗的設計和基本資訊。

CD3D重組蛋白的基本資訊:

常用中文名:CD3D recombinant protein.

亞型:免疫球蛋白超家族蛋白。

基因名: CD3D

基因 ID: 11185

外顯子數量:6

分子量:約2.6萬道爾頓。

基因本體:CD3 基因家族是 T 細胞受體複合物的組成部分。

貨號聚氧乙烯PA1000-5920

參考資料: Schwartz Rh 1990. science. 248(4961):1349-1356.

實驗設計:1轉殖CD3D基因:

a.獲取CD3D基因的DNA序列。

b.將CD3D基因轉殖到適當的表達載體中,例如PET-28A(+)。

c.確定轉殖的CD3D基因序列是否正確。

2.重組蛋白表達:

a.轉化能力強的大腸桿菌(例如,BL21(DE3))。

b.將菌落在LB培養基中培養,並加入適當的抗生素(例如卡那黴素)進行選擇。

c.異丙基-D-硫代半乳糖苷 (IPTG) 的新增誘導 CD3D 蛋白的表達。

d.收集細菌溶液並離心。

3.蛋白質純化:

a.使用細胞破碎溶液提取CD3D蛋白。

b.應用親和純化方法,例如使用His標籤純化,使用鎳柱。

c.對純化的蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳,以驗證蛋白質的純度和大小。

4.蛋白質結構鑑定:

a.使用質譜(例如質譜)和蛋白質印跡方法鑑定 CD3D 重組蛋白。

b.進行N端序列測定和質譜分析,以確定蛋白質序列和分子量。

c.可選地,使用圓二色光譜研究蛋白質的二級結構。

5.功能資格:

a.進行體外細胞實驗,如淋巴細胞活化試驗,以檢測CD3D重組蛋白的生物活性。

b.進行動物模型實驗以評估CD3D重組蛋白在小鼠實驗中的功能和全身作用。

通過上述步驟,我們能夠成功合成和表徵CD3D重組蛋白,以進一步研究其生物學功能和潛在的臨床應用。

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