抗體是指漿細胞在抗原的刺激下被B淋巴細胞分化產生的免疫球蛋白,能特異性地與相應的抗原結合。 所以在實驗中,用於WB、IP、IHC、IF、CHIP之抗體之間有什麼區別?
Western blot(WB)是生命科學領域非常常用的分子生物學實驗技術,其原理是利用SDS-PAGE分離蛋白質,然後將蛋白質轉移到膜上,然後使用抗體檢測蛋白質。 在實驗過程中,由於電泳前蛋白質的熱變性,蛋白質被線性化,破壞了維持蛋白質二級和**結構的氫鍵,需要識別線性表位的抗體。 因此,WB抗體一般是以合成肽為抗原製備的。
IHC(免疫組化)是一種利用標記抗體通過抗原抗體特異性免疫反應和化學螢光顏色反應來研究細胞或組織中抗原的技術。 在免疫組化實驗過程中,需要對組織或細胞進行固定,以保持細胞形態和結構在其天然狀態下的一致性,並保證組織細胞抗原特異性的穩定性。 但是,化學物質的固定化會使蛋白質變性,這將不同於其天然狀態下的蛋白質結構,也不同於WB中的加熱和變性結構。
因此,在IHC IF實驗中,最合適的是以重組蛋白為抗原製備的抗體,也可以採用人工合成多肽作為抗原製備抗體。 如果抗體用於識別線性表位(例如,蛋白質上連續的幾個氨基酸),則該抗體可用於 IHC 和 WB,而如果抗體識別構象表位,則只能用於 IHC。
IP(免疫沉澱):一種通過抗原和抗體的特異性反應純化和富集樣品中目標蛋白的方法。 通常,靶蛋白及其相應的抗體(蛋白A G)通過形成免疫複合物而沉澱。 IP技術根據檢測目標的不同可分為以下三種型別:chip、RIP和co-LP。 Chip是利用IP技術檢測富集後與蛋白質結合的DNA量RIP 是檢測到的與其結合的 RNA 量;Co-IP 是測量到它結合的蛋白質量。
免疫沉澱是利用抗體來識別和結合天然狀態下的蛋白質,因此在做IP實驗時最好選擇以天然蛋白製備的抗體作為抗原,當然也可以選擇以重組蛋白作為抗原製備的抗體。
就是這樣用於WB、IP、IHC、IF、CHIP之抗體之間有什麼區別?