1. 什麼是細胞傳代?
細胞傳代是細胞培養過程中的一項基礎技術,是指在一定條件下對培養的細胞進行分離和再培養的過程。 在傳代過程中,細胞逐漸生長並充滿整個培養容器,因此需要分離和重新培養。 細胞傳代是實驗室細胞培養的基本操作之一,也是細胞生物學實驗中必不可少的步驟之一。
第二,細胞傳代的基本步驟。
1.細胞分離:將原代細胞或傳代細胞從培養容器壁上分離。 常用的分離方法有機械分離和酶解。 機械解離是一種通過輕輕敲擊或刮擦細胞以將其從培養容器壁上分離的方法。 酶水解是新增特定的酶,使細胞之間的連線脆弱且易於分離。
2.細胞洗滌:洗滌分離的細胞以去除培養基中殘留的酶和雜質。
3.細胞計數:對洗滌的細胞進行計數以確定傳代所需的細胞數。
4.細胞分散:將洗滌後的細胞分散,使細胞均勻分布在培養基中。 常用的分散方法有機械分散法和酶解法。
5.細胞接種:將分散的細胞接種到新的培養容器中,並加入適量的培養基。
6.培養:將接種的培養容器放入恆溫培養箱中,進行細胞培養。
3.傳代細胞的型別。
根據細胞的特性和特性,傳代細胞可分為原代細胞和連續細胞系兩大類。 原代細胞是從體內取出後直接培養的細胞,一般只能培養有限的世代(10-20代),之後會衰老和死亡。 連續細胞系由原代細胞突變而來,具有無限增殖的能力,如腫瘤細胞、雜交瘤細胞等。 常見的連續細胞系有HeLa細胞系、A549細胞系、BeAS-2B細胞系等。
4.注意事項。
1.術前準備:術前需要準備好所需物品,如培養皿、吸管、離心管、顯微鏡等,並消毒。 同時,操作人員需要洗手並穿戴防護服、口罩等個人防護裝備。
2.操作過程:操作過程中要注意無菌操作,以免汙染。 同時,要掌握細胞分離、洗滌、計數、分散、接種等技術要點,保證細胞的活力和純度。
3.培養條件:細胞傳代需要在恆溫、恆濕、無菌的環境中進行,以保證細胞的正常生長和繁殖。 同時,需要定期檢查細胞的生長狀態和形態特徵,以及培養基的pH值和營養成分是否正常。
4.廢物處理:廢介質和細胞在丟棄之前需要消毒,以避免對環境和人類造成危害。
總之,細胞傳代是實驗室中一項重要的技術操作,需要掌握相關的基礎知識和技術要點,才能保證細胞的正常生長繁殖。 同時,要嚴格遵守操作規程和注意事項,避免汙染和安全事故的發生。