NK細胞概述：
自然殺傷（NK）細胞屬於先天淋巴細胞家族，在人類中通常定義為CD3-CD56+細胞，佔迴圈淋巴細胞的5%至15%。 NK細胞是抵禦病毒感染和細胞突變的第一道防線，無需事先致敏即可殺死威脅宿主的癌細胞、同種異體細胞和感染外來病原體的細胞，被認為是癌症免疫監視、移植排斥反應和早期病毒免疫的關鍵效應細胞。
圖 NK細胞（黃色）和癌細胞（紅色）。
nk細胞免疫
CAT免疫的成功激發了研究人員利用其他免疫細胞治療癌症的興趣，簡單來說，細胞免疫就是收集人體自身免疫細胞，經過體外培養後將其數量成倍增加，然後將它們輸回人體，一方面消除癌細胞、突變細胞，另一方面， 啟用和增強機體免疫力，控制癌細胞轉移和**。與CAT-T**相比，NK**可靶向多種致病抗原，細胞毒性更強，且不分泌引發細胞因子釋放症候群（CRS）的主要細胞因子，可大大降低不良反應風險，備受期待。
NK細胞的主要策略**：
體外活化的自體或同種異體NK細胞、NK細胞和單轉殖抗體（例如免疫檢查點抑制劑）聯合用於誘導抗體特異性細胞毒性（例如抗EGFR西妥昔單抗）、CAR-NK細胞免疫**等。
目前市面上尚無NK細胞**，但其臨床試驗正在如火如荼地進行中，截至11月，“NK細胞”的搜尋結果已高達720例，NK細胞**在急性髓系白血病、慢性粒細胞白血病、骨髓增生異常症候群、神經母細胞瘤、胃癌等實體瘤中均顯示出良好的效果。 肝癌、肺癌和腸癌。
圖 在ClinicalTrials中搜尋結果： “NK細胞”
體外擴增NK細胞**：
除了從自體或同種異體外周血中分離NK細胞外，還可以從臍帶血和幹細胞分化中獲得NK細胞，此外，由於以上三種方式獲取細胞的方式繁瑣，在CAT-NK的研究中，許多研究人員使用NK-92進行進一步修飾，在臨床前研究中取得了良好的效果， 值得注意的是，細胞在輸注前需要照射。
人外周血NK細胞的分離純化方案：
製備：15ml離心管（ABS7102）或錐形管，HANK'S溶液（ABS9257）或PBS（ABS962），人淋巴細胞分離溶液（ABS930）。
圖 Abics 人淋巴細胞分離溶液 （ABS930）。
1. 獲取PBMC
1）準備無菌15ml離心管或錐形管;
2）加入淋巴細胞分離液5ml;（注意：淋巴細胞分離器在使用前應恢復到室溫，18-25）。
3）hank'S溶液（ABS9257）或PBS（ABS962）緩衝液按1：1比例稀釋（如果全血樣本粘稠，可適當增加比例）稀釋抗凝全血樣本;
4）小心地將新鮮稀釋的4ml全血樣品加入淋巴細胞氫化薊酸鹽的頂部，沿著壁管非常緩慢地靠近分離層;（注意：切記不要弄渾淋巴細胞分離器）。
5）小心放入離心機（擺出式轉子），4離心20-30min，轉速為400g-1000g;（注意：應拆下離心機制動器並等待自然停止）。
6）小心取出管子，切記不要振動;
7）上層為淡紅色透明等離子體，其後為緻密白色細環，即PBMC;
8）吸出上清液後，輕輕吸出血沉棕黃層，轉移到新的離心管中;
9）用PBS重懸，室溫離心，300g，10min，重複操作2次，棄去上清液，用少量PBS重懸。
2. NK細胞的純化
NK細胞純化最常用的方法是磁珠分選，包括陽性分選和陰性分選，人NK細胞的發育階段主要基於CD34、CD117、CD56和CD94的表達水平。 CD56、CD56 表達增加是 NK 成熟的關鍵CD16+可以識別和分離未被其他淋巴細胞汙染的NK細胞。 此外，白細胞介素2 15受體（CD122）也是NK細胞發育後期的重要標誌物。
3. NK細胞培養
1）將純化的NK細胞重懸於免疫細胞無血清培養基（ABS9772）中，並以一定密度接種在培養皿或培養瓶中。
2）在免疫細胞的無血清培養基中加入100-200IU ml的IL-2，保證NK細胞的增殖和活化，有助於改善細胞毒性，與IL-15合用可促進NK細胞增殖，促進NK細胞活化。
3）將細胞在37的培養箱中培養至少48小時，然後進行細胞功能鑑定等後續實驗。
名詞的一般解釋：
陽性篩查：磁珠結合表面標記物，這些標記物需要篩選細胞以進行純化。
陰性篩查：採用磁珠結合等手段去除混合細胞中除目標細胞外的其他細胞，達到純化的目的。
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引用
1] 公尺錦濤;袁成良. NK細胞相關免疫檢查點及其抑制劑的研究進展[J].現代癌症學雜誌， 2023， 31（24）： 4645-4650
2] shimasaki n, jain a, campana d. nk cells for cancer immunotherapy[j]. nature reviews drug discovery, 2020, 19(3): 200-218.