陽離子脂質體是遞送小干擾RNA(siRNA)的有效載體。 以下是陽離子脂質體遞送siRNA的詳細步驟:
1.陽離子脂質體的製備:陽離子脂質體是由陽離子表面和脂質雙層組成的奈米顆粒。 可由膽鹼、膽酸等陽離子化合物與磷脂醯膽鹼、磷脂醯甘油等脂質混合制得。
2.合成 sirna:siRNA 是由兩條互補的 RNA 鏈組成的雙鏈 RNA 分子。 其中一條鏈具有特定的序列,該序列與目的基因的mRNA互補結合,從而抑制其翻譯過程。 siRNA可以通過化學合成或轉錄產生。
3.脂質體與 siRNA 複合物:陽離子脂質體通常帶正電荷,而 siRNA 帶負電荷。 因此,他們可以通過靜電相互作用組合。 將陽離子脂質體與 siRNA 混合可以形成穩定的脂質體 siRNA 複合物。
細胞攝取:將陽離子脂質體siRNA複合物新增到目標細胞培養基中。 由於陽離子脂質體具有正電荷,它們可以與帶負電荷的細胞表面分子相互作用,例如醣基化蛋白質、醣脂等。 這種相互作用促使陽離子脂質體siRNA複合物與細胞膜結合並通過內吞作用進入細胞。
5.內化和溶酶體逃逸:一旦進入細胞,陽離子脂質體 siRNA 複合物就會被囊泡包圍並形成內體。 為了將siRNA釋放到細胞質中,複合物需要逃避溶酶體的降解過程。 這可以通過以下方式完成pH敏感脂質或新增膜破裂劑來實現它。
6.解離和靶向:一旦溶酶體逃逸,陽離子脂質體 siRNA 複合物就會解離並釋放 siRNA。 siRNA 可以補充目的基因的 mRNA,並指導 RNA 誘導的沉默複合物 (RISC) 的形成。 RISC識別並降解靶mRNA,從而抑制靶基因的表達。
總之,陽離子脂質體通過合成和與 siRNA 復合將 siRNA 遞送至靶細胞。 一旦進入細胞,陽離子脂質體就會釋放siRNA,並通過RNA誘導的沉默機制抑制靶基因的表達。 這種遞送方法可用於基因沉默研究和基因**等領域。