牛血清白蛋白 (BSA) 是牛血清中的一種球蛋白,含有 607 個氨基酸殘基,分子量為 66446kDa,等電點為47。
牛血清白蛋白(BSA)在生化實驗中有著廣泛的應用,例如在WB實驗中加入BSA,通過增加溶液中蛋白質的濃度來保護酶。 防止酶的分解和非特異性吸附,可以減少某些酶的變性,減少由加熱、表面張力和化學因素等不利環境因素引起的變性。
蛋白質濃度的測定 將 BCA 工作溶液配置為 50:1。 10ulc溶液(蛋白質標準品)+ 90ulPBS溶液稀釋至05 mg ml 蛋白質標準品。 然後將蛋白質標準品分別加入96孔板的第1和第8標準孔中,並將待測樣品的10ul加入其他樣品孔中。 分別將PBS加入20ul。 向每個孔中加入200ulBCA工作溶液,並在室溫下放置2小時。 用酶標儀測定蛋白質濃度:測量 A562 並根據開始計畫我的 2024 年標準曲線計算蛋白質濃度。
1. 蛋白質
它是牛血清的主要成分。 除攜帶金屬離子、脂肪酸和激素蛋白外,主要還有白蛋白和球蛋白。 纖維蛋白紅素細胞促進細胞附著;A2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用;胎牛血清中含有胎兒球蛋白,促進細胞附著;轉鐵蛋白結合鐵離子,降低其毒性和細胞利用率。
2.肽血小板生長因子可以促進細胞**,是肽家族的主要成員,是主要的細胞增殖因子;成纖維細胞生長因子、表皮細胞生長因子、神經細胞生長因子等,雖然在血清中的含量很少,但對細胞生長也有一定的作用。
3.荷爾蒙 荷爾蒙對細胞的影響是多方面的。
胰島素:促進細胞對葡萄糖和氨基酸的攝取,並與細胞促進**有關。
胰島素樣生長因子:它與細胞表達的胰島素受體結合,使其具有與胰島素相同的作用。
生長激素:促細胞增殖作用。
4.其他成份
氨基酸、葡萄糖、酮酸等對多種營養素的合成培養基意義不大。 蛋白質結合狀態的微量元素對細胞培養感興趣。
BSA通常用作限制性或修飾酶的儲存和反應溶液中的穩定劑,因為某些酶在低濃度下不穩定或活性低。 加入BSA後,可能起到“保護”或“載體”作用,許多酶加入BSA後可以大大提高其活性。 不需要將 BSA 新增到 BSA 中的酶通常不受影響。 對於大多數底物DNA,BSA允許更完全的消化和可重複的切割。 在 37 時,當酶切反應超過 1 小時時,BSA 可以使酶更加穩定,因為許多限制性內切酶只能在 37 小時以下存活在不含 BSA 的反應緩衝液中10"20分鐘甚至更短。 另一方面,BSA 可以結合緩衝液或底物 DNA 中的金屬離子和其他化學物質,從而抑制限制性內切酶活性。