ATP廣泛存在於動物、植物、微生物和培養細胞中,是一種生物能量貨幣,能量電荷是描述細胞能量代謝狀態的主要引數。 測量ATP含量並計算能量電荷,可以反映能量代謝的狀態。
HK催化葡萄糖與ATP合成葡萄糖-6-磷酸葡萄糖,葡萄糖-6-磷酸脫氫酶進一步催化葡萄糖-6-磷酸脫氫生成NADPH,NADPH在340nm處具有特徵吸收峰,NADPH和ATP的含量與ATP的含量成正比,從而反應ATP含量。 開始計畫我的 2024 年
1.血清(紙漿)中ATP的提取:按血清(紙漿)的體積(ml):酸提取體積(ml)的比例為1:5 10(建議取0左右。取血清(漿液)1ml,加酸性提取物1ml),冰浴勻漿,8000g 4離心10min;取上清液至另一EP管中,加等體積鹼提取物中和,混勻,8000g 4離心10min,取上清液,置於冰上檢測(不作蛋白質含量測定)。
2.組織中ATP的提取:按組織質量(g):酸性提取體積(ml)的比例為1:5 10(建議稱量0左右。1g組織,加酸性提取物1ml),在冰浴中勻漿,以8000g 4離心10min,取上清液至另一EP管,加等體積鹼性提取物中和混勻,8000g 4離心10min,取上清液,置於冰上檢測(不作蛋白質含量測定)。
3.細胞或細菌中ATP的提取:先將細胞或細菌收集到離心管中,棄去上清液,根據細菌或細胞的數量(104):酸提取液體積(ml)的比例為500 1000:1(建議500萬個細菌或細胞加入1ml酸性提取物),超聲粉碎1min(冰浴, 強度20或200W,超聲波2s,停止1s),8000g 4離心10min;取上清液至另一EP管中,加等體積鹼提取物中和,混勻,8000g 4離心10min,取上清液,置於冰上檢測(不作蛋白質含量測定)。
測定步驟: 1.將分光光度計或酶標儀預熱30min以上,將波長調節至700nm,將蒸餾水調節至零。
2、顯色劑的製備:使用前請根據所用顯色劑的體積使用(樣品數為02ml)中試劑四(ml):試劑五(ml)=1:5。想用多少就用多少。
ATP 含量測定試劑盒規格:
使用化學發光分析儀在560nm的波長下監測發光。
可檢測到低至 0預先存在的 1 PMOL 的 ATP 或在動力學反應系統中形成的 ATP
螢光素酶和螢光素是單獨包裝的,這使得研究人員能夠優化其樣品和儀器的條件。
所含試劑足以進行 200 次 ATP 測定(樣品體積為 500 L)或 1,000 次 ATP 測定(樣品體積為 100 L)。