中華人民共和國農業行業標準
ny/t 4305-2023
植物油二甲氧基乙烯基苯酚的測定高效液相色譜法
determination of 26-dimethoxy-4-vinylphenol in vegetable oils-
high performance liquid chromatography
前言
本檔案符合GB T 11-2020《標準化工作指南第1部分：標準化檔案的結構和起草規則》。
本檔案由農業農村部農村產業發展司提交。
本檔案由農業農村部農產品與標準化技術委員會負責。
本檔案由中國農業科學院油料作物研究所、天津市農業科學院、農業農村部農產品及加工品質量監督檢驗檢測中心（天津市）起草。
本檔案主要起草人：黃鳳紅、鄭暢、李文林、劉長生、萬楚雲、周琦、張強、魏芳、鄭明明、劉正輝、陳秋生。
範圍
本檔案規定了植物油和調和油中2,6-二甲氧基-4-乙烯基苯酚的測定方法。
本檔案適用於植物油和調和油中2,6-二甲氧基-4-乙烯基苯酚的測定。
本文件中方法的檢出限為110mg kg，定量限為320 mg/kg。
規範性參考文獻
以下檔案的內容通過正文中的規範性引用構成本檔案的基本規定。 其中，註明有日期的參考檔案，只有與該日期對應的版本適用於本檔案;對於未註明日期的引用，最新的版權（包括所有修訂）適用於本文件。
GB T 603化學試劑試驗方法所用製劑及製品的製備。
GB T 5524 動植物油脂樣品.
GB T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法。
原則
用甲醇與正己烷的混合溶液萃取植物油中的2,6-二甲氧基-4-乙烯基苯酚，再用裝有二極體陣列檢測器的高效液相色譜儀測定，保留時間定性，外標法定量。
試劑和材料
除另有說明外，所用試劑為分析純水，所用水為GB T 6682規定的一級水。 使用前煮沸10分鐘，然後冷卻。 將使用的器皿用水清洗，並在100烤箱中乾燥1 2h。
4.1甲醇（色譜純）。
4.2 正己烷。
4.3.醋酸。
4.4 1%醋酸水：準確吸出10毫公升乙酸（4.）3）加水至100毫公升。
4.5甲醇+水（80+20）：取甲醇80ml（4.）1）用20毫公升水攪拌均勻。
4.6,2,6-二甲氧基-4-乙烯基苯酚（C10H12O3，CAS號28343-22-8）：純度98%。
4.7 2,6-二甲氧基-4-乙烯基苯酚標準溶液的製備;
4.7.1 標準儲備液：精密稱量 100 mg 2.6-二甲氧基-4-乙烯基苯酚 （4.）6） 標準品，加甲醇 （4.）1）溶解並將體積設定在10ml棕色容量瓶中至濃度為10 mg ml 標準儲備溶液，-20 或更少，避光儲存。
4.7.2.標準工作液：吸取一定量的2,6-二甲氧基-4-乙烯基苯酚標準儲備液（47.1）用甲醇溶液（45）稀釋得到的濃度為50 μg/ml、10.0 μg/ml、 20.0 μg/ml、50.0 μg/ml、100.0 μg/ ml、200.0 克毫公升和 500 毫公升0 g ml 標準工作溶液。 即用型。
儀器裝置
5.1 高效液相色譜儀：配備二極體陣列檢測器（PDA）或紫外檢測器（UVD）。
5.2 分析天平：電感 00001 g。
5.3.離心機：轉速不低於5 000 r min。
5.4.渦旋振動篩。
5.5 微孔膜：022 m，有機教師。
取樣和標本儲存
6.1 取樣。
取樣按GB T 5524的規定進行，實驗室收到的樣品應具有真實的代表性，在運輸和儲存過程中沒有損壞或變質。
6.2 儲存。
標本應存放在4年以下的冰箱中，避光儲存。
檢測步驟
7.1.樣品的製備。
稱量約 1 克（精確到 0.）。001 g） 樣品在 10 ml 離心管中，加入 15毫公升正己烷（42） 和 15毫公升甲醇溶液（4.）5）、渦旋萃取5min，5000rmin離心5min，保留下萃取，將上層溶液轉移到另一10ml離心管中，繼續向上層溶液（45）、重複提取3次，合併下層提取液，混合均勻，以5 0000 r min離心5 min，吸收上層殘留的試樣溶液，將下層提取液轉移至10ml容量瓶中，用甲醇溶液（45）將音量設定為刻度，搖勻，過膜，在4種條件下儲存以備後用。
7.2 測定條件。
7.2.1 液相色譜參考條件。
色譜柱：C18（內徑 4.）6 mm，粒徑 5 m，柱長 250 mm）;
流動相：A為甲醇（41）、b為1%醋酸水（44）；
流速：10 ml/min；
柱溫：30;
注射量：10公升;
檢測波長：270 nm。
流動相梯度洗脫過程如表1所示。
7.3.色譜測定。
當超過線性範圍時，分析前應根據測得的濃度進行適當的因子稀釋，標準曲線溶液中2,6-二甲氧基-4-乙烯基苯酚的響應值應在儀器的適當範圍內。 以含量響應峰面積為縱坐標，以2,6-二甲氧基-4-乙烯基苯酚含量為橫坐標，以標準L作曲線。 保留時間是定性的，外標是定量的。
7.4. 結果的計算和呈現。
試樣中2,6-二甲氧基-4-乙烯基苯酚的含量按公式（1）計算或由色譜資料處理系統計算。
式中：x——樣品中2,6-二甲氧基-4-乙烯基苯酚的含量值，單位為毫克/千克（mg kg）;
C-2,6-二甲氧基-4-乙烯基苯酚濃度，單位為微克/毫公升（g ml），從標準工作曲線得到的樣品溶液;
v——樣品溶液最終體積值，單位為毫公升（ml）;
m - 樣品溶液所表示的樣品質量的數值，單位為克 （g）。
計算結果表示為並行測量的算術平均值，結果保持在小數點後 2 位。
精度
在重複性條件下獲得的 2 次獨立測定結果之間的絕對差異不得超過算術平均值的 10%。
*從：