poly(a) 尾是真核生物 mRNA 上的乙個特徵,它由多個腺苷酸組成,位於 mRNA 的 3 處'結束。 Poly(a)尾部在基因表達的調控中起著重要作用,特別是在mRNA穩定性的翻譯和控制中。 mRNA 3' 末端的多聚尾阻止核酸外切酶與 mRNA 3 配對'末端降解,增加mRNA的穩定性。 此外,polya 在翻譯過程中充當“翻譯增強劑”。 研究表明,去除 polyA 位點可使 mRNA 表達水平降低多達 10 倍。 多聚腺苷酸化訊號需要3個部分:多聚腺苷酸化訊號序列5'-aauaaa-3'; 剪接位點和尾部位點 ya; 下游保守序列,如富含 u 或 (g+u)-富集。
除了多聚尾訊號外,真核基因表達載體元件還包括選擇性標記基因和報告基因
選擇性標記基因是表達載體的重要組成部分,通常編碼正常細胞中不存在的酶。 雖然在選擇壓力下可以從少量轉化細胞中分離出未轉化的細胞,但選擇標記基因的應用也有其自身無法克服的缺點。 例如,當轉化的細胞已經含有抗性基因作為標記基因時,在引入第二個外源基因時會使用不同的選擇標記基因,而選擇標記基因的實際應用非常有限。 此外,從健康和安全的角度來看,選定的標記基因及其產物在使用時可能有毒或致敏。 因此,在轉基因轉基因中,去除選擇標記基因有利於提高轉基因的食品安全性和環境安全性,也可以對同乙個受體細胞進行多次轉基因操作。 目前,已經開發出一些去除選擇標記基因的轉化技術,如位點特異性重組系統、選擇標記基因的組織特異性表達、共轉化、基因組中轉移基因的重新定位以及通過轉座子進行靶基因替換等。
報告基因主要起到報告基因和識別的作用,其表達產物對受體細胞無毒,能反映外源基因在受體細胞中的表達水平。
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