用於細菌細胞基因電轉移的電轉換儀器實驗方案

儘管細菌細胞具有細胞壁，但實驗表明它們不會對基因電轉移形成屏障。 因此，目前大多數基因電轉移實驗都使用完整的細胞而不是分離的原生質體。 下面以大腸桿菌基因電轉移為例，介紹其基因電轉移實驗步驟。

1.細胞培養。

將大腸桿菌單轉殖接種到LB生長緩衝液中，並在搖晃下生長過夜以生長至穩定階段。 第二天，將其稀釋 100 倍，並在細胞生長到對數生長期（例如，JM105 的 OD600 為 0）時繼續振盪 37 年。5 1），將細胞懸浮液置於4下15分鐘。

2.實驗細胞的製備。

將冷卻的大腸桿菌細胞懸浮液以4,000g在4°C下離心10分鐘。 然後，除去上清液，用電穿孔溶液（PM溶液）洗滌細胞2-3次，並根據實驗需要用該溶液將細胞重懸至指定濃度，例如5x10ml，並將其保持在冰上以備後用。

3.實驗前的預培養。

將DNA加入指定量（例如，10ngml）的人實驗細胞樣品中，在渦旋攪拌下將DNA與細胞充分混合，並將混合物置於冰上靜培養5分鐘。

4.電場處理。

將樣品注入電穿孔室（預冷至0 4）並施加指定的電場（電場強度，脈衝寬度，脈衝數和最佳電場條件的時間間隔）。