微生物樣品儲存是指儲存微生物菌株的活力和遺傳特徵的技術。 微生物在使用和傳代過程中容易受到汙染、突變甚至死亡,通常會導致菌株降解。 菌種儲存的目的是保持菌種的活力,避免流失,防止外來微生物汙染,儘量減少或防止突變,保持菌種原有的活力和特性。 培養儲存的基本原理是使微生物的生命活動進入半永久性休眠狀態,即將微生物的代謝限制在最低限度。
實驗室常用的保鮮方法有甘油保鮮法、斜面保鮮法、穿刺保鮮法、液體石蠟覆蓋法、沙漠土壤保鮮法、凍乾法等。 在這些儲存方法的基礎上,微生物開發了一種陶瓷珠儲存方法,可以更有效地儲存菌株。
1.甘油儲存
該方法適用於培養物的中長期儲存,可儲存1年以上。 由於甘油本身較稠且難以配量,因此通常與生理鹽水以1:1的比例混合,製成終濃度為50%的甘油溶液。 使用時應與菌液按甘油50%:1:1的比例混合,使甘油終濃度達到20%-30%,甘油濃度過高或過低均不利於培養物的儲存。 將甘油培養物移至 -80 冰箱中長期冷凍。 當需要使用培養物時,將冷凍管置於 37°C 水浴中並快速解凍直至培養物完全解凍,然後取出培養物進行實驗。
該方法應用範圍廣,操作簡單,保質期長,不易變異。
2.斜面儲存方法
將菌株接種到合適的固體斜坡培養基中。 一旦細菌充分生長,將其轉移到 4°C 冰箱中儲存。 保質期取決於微生物的型別。 一般來說,黴菌、放線菌和孢子形成體需要每2-4個月傳代一次,酵母菌每兩個月傳代一次,細菌最好每月傳代一次。 當需要培養時,可以通過接種環從傾斜的平面接種少量細菌。
這種方法的優點是操作簡單,使用方便,不需要特殊裝置,並且可以隨時檢查儲存的細菌是否死亡、變異或被外來細菌汙染。 缺點是保質期短,菌株容易發生突變,因為培養基的理化性質不是嚴格恆定的,反覆傳代會改變微生物的代謝,這種方法被外來細菌汙染的概率很高。
3.穿孔儲存方法
準備一管半固體運輸培養基,用接種針挑取培養物,從半固體培養基中心垂直穿刺,直到接近管底,但不要穿刺,然後沿原穿刺線拉出接種針,放入4冷凍室儲存。 這種方法與斜面儲存方法一樣,需要定期傳代。
4.一種液體石蠟覆蓋層儲存方法
這種方法是斜面儲存法的輔助方法。 將菌株接種到合適的固體斜坡培養基中。 一旦細菌充分生長,注入無菌液體石蠟以覆蓋整個斜坡,並將其直立存放在 4 冰箱中。 液體石蠟可以防止菌株因介質中水分蒸發而死亡,還可以將菌株與空氣隔離,降低菌株的代謝活性,延長儲存時間。 當需要菌株時,可以使用接種環從斜面上拾取少量菌株。
這種方法的優點是操作簡單,不需要特殊裝置,不需要頻繁通過,儲存時間長。 缺點是存放時必須直立放置,占用空間大。
5.沙漠土壤保護法
將培養的菌株與無菌沙漠土壤混合,以吸附沙漠土壤載體上的細菌。 乾燥後,轉移到 4°C 冰箱中儲存。 使用培養物時,只需取出幾粒沙子即可。
該方法操作簡單,培養物保質期長。
6.冷凍乾燥
冷凍培養物,並通過加壓昇華除去水分。 這可以降低細胞的生理活性,使細菌長時間存活。 當需要使用培養物時,使用無菌水或培養基重懸細胞,然後將細胞懸浮液轉移到固體培養基板上進行培養。
這種方法適用於細菌的長期儲存,但相關裝置和操作比其他儲存方法更複雜。
7.一種陶瓷珠儲存方法
在上述儲存方法的基礎上,微生物研製出一種陶瓷珠儲存方法。 與傳統的儲存方法相比,這種方法具有更好的儲存效果,方便,減少了反覆凍融迴圈造成的損害。
每個陶瓷珠冷凍管含有 12 個磨砂陶瓷珠和培養儲存液。 取對數生長菌株並將它們轉移到冷凍管中,倒置並混合,此時菌株將均勻分布在儲存溶液中。 用移液器除去保鮮液,並在表面張力的作用下,每顆瓷珠上覆蓋一層保鮮液,應變儲存在這層保鮮液中。 含有培養物的冷凍管可以轉移到 -80°C 進行長期冷凍(通常約為 1 年)。
需要使用培養物時,將冷凍管從-80冰箱中取出,輕輕搖動分散陶珠,取陶珠接種在培養基板上進行條狀培養,或接種到液體培養基中進行**培養。 接種後,迅速將冷凍管放回冰箱。
對於厭氧菌株,我們還可以提供含有還原劑的厭氧保鮮液,並將菌株真空包裝,以避免因暴露於氧氣而死亡。
保護文化的方法有很多種,但原則是相似的。
首先要做的是選擇好的純種馬。 使用孢子,孢子和微生物轉殖;
其次,創造低溫、乾燥、缺氧等條件,抑制微生物的代謝功能,使其生命活動降低到最低水平或進入休眠狀態,從而延長菌株的壽命,保持菌株的原始形態,防止突變。 無論採用哪種儲存方法,都要求細菌不死亡,不被外來細菌汙染,在儲存過程中不降解。
短期儲存 坡口儲存
傾斜儲存是目前最常用的短期儲存方式,操作簡單,使用方便,但需要定期接種疫苗。 因此,工作量大,通過次數容易變異。 因此,它僅適用於經常使用的短期培養物。
1.製備培養基時,營養物質的濃度應略低,特別是醣類應盡可能多,如果菌株產生酸,應加入少量碳酸鈣;
2.傾斜面填充量,傾斜後斜面不應超過試管長度的1 2;
3.斜坡栽培,溫度略低於最佳溫度,時間稍長;
4.生長完成後,密封存放在 2-8 冰箱中。 對於每個通道,黴菌、放線菌、孢子菌可儲存1-3個月,酵母菌可儲存2個月,細菌可儲存1個月。
啟用和使用:
從冰箱中取出斜坡,挑選菌落繁殖細菌,或切割黴菌進行繁殖和培養,培養完成後即可使用。
長期儲存:冷凍儲存。
冷凍儲存是最常用的長期儲存方法之一,適用於各種微生物。 與傾斜儲存相比,它減少了工作量並延長了儲存時間。
1.準備新鮮的斜面或平板培養物,10%無菌甘油溶液;
2. 2.用甘油溶液洗去細菌或孢子以形成細菌懸浮液;
3. 3.將每管 1 毫公升的細菌懸浮液分裝到冷凍管中,並放入程式冷卻箱中;
4. 4.將程式冷卻箱放入-80冷凍室冷凍;
5.可儲存1-2年。
啟用和使用:
1.從冰箱中取出冷凍培養物,準備溶解在水浴中,室溫下不要熔化;
2.將菌株迅速放入水浴中快速溶解,40 個細菌和 30 個真菌,約 2 分鐘後全部溶解,然後接種到相應的培養基中;
3.在適當的條件下完成培養。