中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準
sn/t 5442-2022
測定出口植物源性食品中的丙硫菌唑及其代謝物殘留
液相色譜法質譜分析質譜分析
determination of prothioconazole and its metabolite residues
in foodstuffs of plant origin for export-lc-ms/ms method
前言
本檔案符合GB T 11-2020《標準化工作指南第1部分：標準化檔案的結構和起草規則》。
gb/t 20001.4-2015《標準編制規則 第4部分：試驗方法標準》和SN T 0001-2016《出口食品和化妝品理化測定方法標準編制基本規定》。
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本檔案由中華人民共和國海關總署提交並集中提交。
本檔案由：中華人民共和國合肥海關技術中心、中華人民共和國銀川海關技術中心、中華人民共和國杭州海關技術中心、中國民航大學起草。
本檔案主要起草人：宋偉、韓芳、王芳環、陳達、婁承杰、盧亞寧、劉玉新、周殿兵、丁磊、徐曼曼、王宇、賈雪英、侯建波、鄭平。
範圍
本檔案規定了用於檢測出口植物源性食品中丙硫菌唑及其代謝物脫硫丙康唑殘留的液相色譜-質譜法。
本檔案適用於小麥、大麥、燕麥、黑麥、玉公尺、紅豆、油菜籽、大豆、花生仁、葵花籽、甜菜、生菜、西紅柿、黃瓜、馬鈴薯、梨、葡萄、士多啤梨等植物源性食品中丙硫菌唑及其代謝產物脫硫菌唑殘留量的定性鑑定和定量測定。
規範性參考文獻
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GB 2763 食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量。
GB T6682 分析實驗室用水規格及試驗方法。
術語和定義
本文件中沒有需要定義的術語和定義。
方法原則
丙硫菌唑及其代謝產物脫硫環唑在樣品中的殘留量為01%甲酸乙腈溶液萃取、基質分散固相萃取純化、液相色譜質譜、質譜測定、外標法定量。
試劑和材料
除非另有說明，所用試劑均為分析純水，水為GB T 6682的1級水。
5.1乙腈：色譜純。
5.2 醋酸：色譜純。
5.3.甲酸：色譜純。
5.4 醋酸銨：色譜純。
5.5正己烷：色譜純。
5.6.抗壞血酸。
5.7.氯化鈉。
5.8無水硫酸鎂：在650下灼燒4h，貯存於乾燥器中，冷卻備用。
5.9 1%甲酸乙腈溶液：取10毫公升甲酸（5.）3）加入100ml容量瓶中，使用乙腈（51）將音量調到音階，攪拌均勻，待用。
5. 10 1.5%抗壞血酸溶液：取抗壞血酸15g（56）、用水稀釋，設定為1 000毫公升。
5.11 20%乙腈溶液：取乙腈20ml（5.）1） 用水稀釋並設定為 100 毫公升。
5.12 丙硫菌唑：C14H15Cl2N3OS，CAS號：178928-70-6;丙硫菌唑-脫硫劑：C14H15Cl2N3O，Casno 120983-64-4。純度大於或等於98%。
5.13.標準貯備液的配製：精密稱取丙硫菌唑和脫硫丙康唑標準品適量（精確至0.）。1mg），分別用乙腈溶解，配製至濃度為10 mg ml 標準儲備液，0 4 避光儲存，可使用 6 個月。
5.14 中間混合標準溶液：移液器 100毫公升丙硫菌唑標準儲備溶液和100毫公升去硫丙硫菌唑標準儲備溶液（5.）13）、轉移至100ml棕色容量瓶中，用乙腈設定體積，溶液濃度為10g ml。 0 4 冷藏避光儲存，可使用3個月。
5.15.標準工作液：根據需要，抽取標準中間液適量（514）、配製成125μg/l、2.混合 5 g l、5 g l、25 g l、50 g l 的標準溶液，使用前準備。
十八烷基鍵合矽膠（c18m
n-丙基乙二胺（psam~60m
5.18 膜：022 m，有機教師。
儀器裝置
6.1 液相色譜-質譜諧波質譜儀：配電噴霧離子源 （ESI）。
6.2、分析天平：電感為001 g 和 0000 1 g。
6.3臺粉碎機。
6.4.紙巾搗碎機。
6.6.樣品篩：孔徑為2mm。
6.6.均質機：15000轉分
6.7.渦旋振動篩。
6.8 高速冷凍離心機：轉速不低於10 000 rmin。
分析步驟
7.1.樣品製備和儲存。
7.1.1 小麥、大麥、燕麥、黑麥、玉公尺、紅豆、油菜籽、大豆、花生仁、葵花籽。
取出代表性樣品500g，用粉碎機全部粉碎，充分混合，均勻分成2份作為樣品，裝入乾淨的容器中，密封標記，避光儲存在-18°C以下。
7.1.2 甜菜、生菜、西紅柿、黃瓜、葡萄、士多啤梨、梨、土豆。
取樣按GB 2763的規定進行。 對於個體較小的樣品，所有樣品均在取樣後進行處理;對於具有大個體的基本上均質的樣品，可以在對稱軸或對稱表面上將它們分割或切割成小塊對於拉長、扁平或每個部分具有不同成分含量的樣品，可以在不同的部分切割或切成小塊進行加工取樣後，將樣品切碎，充分混合，四等份取樣或直接放入組織搗碎機粉碎成勻漿，均勻分成2份作為樣品，裝入乾淨的容器中，密封標記，在-18°以下的溫度下儲存。
7.2 提取。
7.2.1小麥、大麥、燕麥、黑麥、大豆、玉公尺、紅豆、土豆。
稱取約5g試樣（精確至0.）。01g），置於帶塞子的50ml棕色離心管中，並迅速加入10ml抗壞血酸溶液（510）、渦旋1min使試樣完全潤濕，然後加入10ml1%甲酸乙腈溶液（59）渦旋振盪後超聲提取10分鐘向離心管中加入 5 g 氯化鈉 （5.）7）渦旋振盪1分鐘;8 000 r min 4 離心 5 min，取 10ml待純化的上清液。
7.2.2 甜菜、生菜、西紅柿、黃瓜、葡萄、梨、士多啤梨。
稱取約5g試樣（精確至0.）。01g），置於帶塞子的50ml棕色離心管中，並迅速加入10ml抗壞血酸溶液（510） 渦旋 1 分鐘加入 10 ml 1% 乙腈甲酸鹽溶液 （5.）9）渦旋並搖動2分鐘，然後加入5g氯化鈉（57）渦旋振盪1分鐘;8 000 r min 4 離心 5 min，取 10ml待純化的上清液。
7.2.3 油菜籽、花生仁、葵花籽。
稱取約5g試樣（精確至0.）。01g），置於帶塞子的50ml棕色離心管中，並迅速加入10ml抗壞血酸溶液（510）、渦旋1min使試樣完全潤濕，然後加入10ml1%甲酸乙腈溶液（59）渦旋振盪後超聲提取10分鐘向離心管中加入 5 g 氯化鈉 （5.）7）渦旋振盪1分鐘;在8000r min4°C離心5分鐘，取2取上清液0ml，再加乙腈飽和正己烷溶液除去油數次，取10ml待純化下層易顏溶液。
7.3.淨化。
7.3.1小麥、大麥、燕麥、黑麥、玉公尺、紅豆、大豆、甜菜、生菜、西紅柿、黃瓜、葡萄、士多啤梨、土豆、梨。
遺囑 1將0ml上清液放入容器中50 mg c1850 mg psa和150 mg無水硫酸鎂（離心管2ml，渦旋30秒，10,000rmin，4離心5分鐘;取 05ml上清液，加05毫公升20%乙腈溶液（5.）11） 通過有機濾膜稀釋至棕色樣品瓶中，用於 HPLC-MS MS 檢測。
7.3.2 油菜籽、花生仁、葵花籽。
遺囑 1將0ml上清液置於充滿150mg C mg PSA（517）和150mg無水硫酸鎂（58）在2ml離心管中;渦旋30秒，10 000 r min 4 並離心 5 分鐘取 05ml上清液，加05毫公升20%乙腈溶液（5.）11）稀釋後，通過有機濾膜（如有渾濁，可按10 000 r min4離心5 min，再取上清液通過有機濾膜）至棕色樣品瓶中進行HPLC-MS MS檢測。
7.4 測定。
7.4.1 液相色譜參考條件。
7.4.1.1 根液相色譜柱：C18 色譜柱，50 mm20 mm （內徑）， 18 m，或同等水平。
7.4.1.2 流動相：A為純水，B為乙腈。
7.4.1.3.柱溫：35°C。
7.4. 1.4 注射量：100μl。
7.4.1.5 流量：04 ml/min。
7.4.1.6 流動相和梯度洗脫條件：見表1。
7.4.2 質譜參考條件。
7.4.2.1 離子源：電噴霧離子源（ESI）。
7.4.2.2、掃瞄方式：正負切換方式。
7.4.2.3、檢測方式：多反應監測模式（MRM）。
7.4.2.4、霧化氣體、幹氣、鞘氣、碰撞氣均為高純氮氣等適宜氣體使用前應調整各氣體的流速，使質譜靈敏度滿足檢測要求。 噴霧電壓、碎裂電壓和碰撞能量等電壓值應優化至最佳靈敏度，參考質譜引數見附錄A。
7.4.3.定性測定。
如果檢測到的質譜峰的保留時間與標準保留時間相差不超過2，則根據液相色譜-質譜質譜聯用條件測定樣品和標準工作溶液5%，定性離子對的相對豐度（表示為強度相對於最強離子豐度的百分比）為相同濃度標準工作溶液的相對豐度，相對豐度的允許偏差不超過表2規定的範圍，則可判斷樣品中相應的分析物。
7.4.4.定量測定。
在相同的實驗條件下，一系列標準工作溶液（515）從低濃度到高濃度進行進樣檢測，並繪製定量子離子峰面積，得到標準曲線。待測試樣中丙硫菌唑及其代謝產物的響應值應在標準曲線的線性範圍內，如果超過線性範圍，應稀釋至相應範圍後再進樣分析。 採用外標法進行定量。 上述色譜條件下丙硫菌唑及其代謝產物脫硫丙康唑的多反應監測（MRM）色譜圖見附錄B，峰時間分別為2.，9分鐘 和 32min。
7.4.5.空白測試。
除不新增樣品外，均按上述測定步驟進行。
7.4.6 結果的計算和呈現。
用色譜資料處理軟體或按公式（1）計算樣品中分析物的量，從計算結果中扣除空白值。
式中：x——樣品中分析物殘留量，單位為毫克/千克（mg kg）;
c——標準工作曲線上被測組分溶液的濃度，單位為微克/毫公升（g ml）;
v——供試品溶液的最終體積，單位為毫公升（ml）;
m - 樣品溶液的當量質量，單位為克（g）。
定量限和**速率
8.1 定量限 （LOQ）。
該方法中丙硫菌唑和去硫菌唑的定量限為0005mg/kg。
8.2 ** 速率。
小麥、大麥、燕麥、黑麥、玉公尺、紅豆、油菜籽、大豆、花生仁、葵花籽、甜菜、生菜、西紅柿、黃瓜、馬鈴薯、梨、葡萄、士多啤梨中不同新增量的丙硫菌唑及其代謝產物的平均**率資料見附錄C。
*從：