最近的一項研究表明,來自Cynodon Dinactylon根部的乙醇提取物可以保護斑節對蝦免受WSSV病毒的侵害,最佳新增濃度為100-150 mg kg。
加入乙醇提取物,濃度為100-150mg kg。 它可以防止蝦中WSSV病毒感染。
第1章 調查方法
1.狗牙根的抗WSSV活性
製備3種濃度的雞草提取物抗WSSV活性,在試驗1濃度下,將150 mg粗乙醇提取物溶於02毫公升純乙醇,與0與8ml蒸餾水混合,然後用渦旋混合器研磨,以達到蝦體重150mg kg的濃度。 對於其餘測試組,在測試 2 和測試 3 中分別以與測試 1 相同的方式施用 100 mg kg 和 75 mg kg 濃度的狗牙根乙醇提取物。
2.體內激發試驗
在挑戰測試中,從孟加拉國Khulna Bhatiyagata的Litopenaeus monodon農場收集了110只無病黑虎蝦,並將其轉移到Khulna大學實驗室的水箱中。 蝦的平均重量是13541±2.927克。 用工業飼料餵養蝦,並在實驗前馴化5天。 每個測試組放養20只蝦,將蝦苗分為5個不同的測試組
陰性對照組 (NC):注入35L PBS溶液。
陽性對照組 (PC):注入 10 L WSSV+25 L PBS。
測試 1 (t1):加入 10 L 雞草 (150 mg kg + 10 L WSSV + 15 L PBS.
測試 2 (t2):加入 10 L 雞草(100 mg kg + 10 L WSSV + 15 L PBS。
測試 3 (t3):加入 10 L 雞草 (75 mg kg) + 10 L WSSV + 15 L PBS。
每組在0小時,6小時,12小時,18小時,24小時,第2天,第3天,第4天從每個池中隨機收集3個蝦樣品,並將樣品儲存在-80°C條件下,然後開始病原體確認試驗。
2. 研究成果
1.HPLC-DAD法測定狗牙根乙醇提取物
採用HPLC-DAD分析狗牙根乙醇提取物中酚類化合物的鑑定和定量。 研究結果表明,狗牙根乙醇提取物中含有高水平的兒茶素、表兒茶素和槲皮素。 還檢測到中低濃度的香草酸、優生酸和對香豆酸(表1)。
表1:狗牙根乙醇提取物中多酚類化合物的含量。
2.狗牙根的抗WSSV活性
通過體內激發試驗觀察蝦的活力,測定狗牙根的抗WSSV活性。 在感染後 4 天內觀察到活性對照 (PC) 組的死亡率。 15天後,對照組(100%)以及三種不同測試(分別為%和85%)的存活率顯著更高。 此外,陽性對照組(PC)的蝦存活時間低於其他組。
3.PCR檢測實驗組WSSV感染
在乙醇提取物實驗組中,所有蝦在整個研究期間都存活了下來,在150 mg kg蝦體重(T1)和100 mg kg蝦體重(T2)的濃度下,蝦中沒有WSSV感染的跡象。 此外,該研究未通過PCR方法檢測到WSSV病毒。
在新增75 mg kg狗牙根的測定中,存活率為85%,分析後未發現WSSV特異性條帶(941 bp)。 然而,在感染測試的第 8 天,在巢式 PCR 中觀察到一條 WSSV 病毒 (298 bp) 條帶**。
3. 得出結論
本研究表明,狗牙根的乙醇提取物含有多種生物活性化合物,這些化合物被認為對斑節對蝦培養中的WSSV病毒具有活性。 研究發現,狗牙根中高濃度的六種化合物是:豐富的生物鹼、多酚和類黃酮**,已知酚酸具有抗病毒生物活性。 本實驗發現,狗牙根乙醇提取物中槲皮素含量最高。
研究發現,在100-150毫克公斤體重的濃度下,來自狗牙根的乙醇提取物對WSSV病毒提供了100%的保護。 在感染檢測階段,PCR方法未檢測到WSSV病毒。
從狗牙根中提取的化學物質可能含有單獨或組合的抗WSSV活性,可以保護蝦免受WSSV的侵害。 在攻擊階段,75 mg kg 的濃度可保護蝦高達 85%,並在第 8 天的巢式 PCR 中檢測到 WSSV 病毒。 這意味著這些化學品需要最大抑菌濃度,而完全保護斑節對蝦的最低WSSV水平必須為100毫克公斤或更多。