ELISA試劑盒實驗前設定

在進行正式的ELISA實驗之前，有必要進行預實驗。 預實驗的目的是初步探究實驗條件，如最佳抗原包被濃度、酶標記二抗的稀釋比例、底物顯色時間等，並對實驗的可行性進行初步評估。

1.設定抗原包被濃度。

將抗原溶液分別以1g ml、2 g ml、4 g ml、8 g ml和16 g ml的濃度稀釋在抗原包衣溶液中。 隨機選擇等量的特異性抗體血清與抗原溶液反應，在37下孵育1小時後洗滌，再加入酶標記的二抗，孵育30分鐘清洗，最後加入底物顯色，反應終止後，用酶標儀在450nm波長處測定各孔的光密度值。 繪製 ROC 曲線以找到截止值。

其次，確定酶標記二抗的稀釋比例。

將已知的陽性和陰性血清樣品用ELISA稀釋液稀釋，將特異性抗體稀釋到不同濃度的酶標記的二抗溶液中，與包被的抗原一起孵育，洗滌後再加入底物顯色，最後用酶標儀測定光密度值。 繪製 ROC 曲線以找到截止值。

3.確定基材的顯色時間。

在微孔板上設定顯色時間5 min、10 min、15 min和30 min，觀察不同顯色時間對實驗結果的影響。 在顯色過程中，房間應遠離光線，以免影響結果的準確性。

通過以上三個方面的實驗前設定，可以對ELISA實驗條件進行初步探索和優化，可為後續的形式化實驗提供可靠的依據。 同時，還可以及時發現實驗中的問題，做出有針對性的改進，提高實驗的準確性和可靠性。 在正式實驗中，可以根據已經探索過的條件進行操作，提高了實驗的重現性和成功率。