背景：
喉鱗狀細胞癌 （LSCC） 是最常見的頭頸部惡性腫瘤之一，超過一半的 LSCC 患者在診斷時處於晚期臨床階段。 近40年來，LSCC的5年生存率明顯下降，亟需發現可靠的LSCC早期診斷靶點和評估預後的最佳生物標誌物，並深入探索LSCC的發生和發展機制。
環狀RNA是由信使RNA前體（pre-mRNA）在3'-5'末端反向剪接形成的單鏈閉環非編碼RNA，大量存在於細胞外，賦予環狀RNA高保守性、高表達豐度和組織特異性等特點。 在最近的研究中，環狀circRNAs在轉錄和轉錄後表觀遺傳學水平上參與了人類神經精神疾病、心血管疾病和其他疾病，尤其是腫瘤的發生和發展。
C1qbp 是一種普遍存在的多功能 RNA 結合蛋白。 研究發現，C1QBP參與黑色素瘤、宮頸鱗狀細胞癌和胰腺癌，其表達在多種腫瘤中失調，起到促進細胞遷移和腫瘤生長的作用。 然而，泛素-蛋白酶體介導的環狀RNA降解C1QBP的調控模式尚未見報道。
文獻**
中國醫科大學附屬第一醫院李凱課題組在Molecular Cancer期刊上發表題為“Circular RNA mtCl1 Promotes advanced laryngeal squamous cell carcinoma progression by inhibiting c1qbp ubiquitin degradation and medianing beta-catenin activation”，揭示circ-mtcl1在轉錄後表觀遺傳水平上調控C1QBP蛋白的泛素化降解，介導Wnt-catenin訊號通路的啟用， 並促進LSCC腫瘤的發展。本研究為理解circRNA和相應的RNA結合蛋白如何調控靶點提供了新的途徑，為LSCC的防治提供了新的靶點和方向。
專案研究
基於RNA測序，作者分析了LSCC患者及其匹配ANM組織的差異表達譜，並篩選了CircmtCl1分子作為後續研究物件。 結合臨床樣本資料和生物資訊學分析，circmtcl1在LSCC細胞和患者中上調，circmtcl1高表達與腫瘤分化相關（P=0.）。003）、T期（p=0.）。001）、淋巴轉移（p=0.）。001）和臨床分期（p=0.）。001），circmtcl1的高表達可作為**LSCC患者臨床預後的獨立預後因素。
FISH和qPCR的定位分析表明，circmtcl1主要分布在胞質溶膠中。 為了研究circmtcl1在LSCC中的調控模式，作者使用RNA下拉和質譜技術尋找與circmtcl1相互作用的RNA結合蛋白C1qbp。 WB和RT檢測CircmtCl1可在轉錄後水平上正向調控C1qBP的表達。 隨後，通過CHX和蛋白酶體抑制劑MG132檢測C1qbp的半衰期，免疫共沉澱結果顯示circmtcl1通過抑制泛素-蛋白酶體途徑抑制C1qbp的降解，從而提高C1qbp的蛋白表達水平。
為了確定CircmtCl1在LSCC中的功能作用，作者過表達並干擾了CircmtCl1，基於既往KEGG分析，C1qBP可富集於典型的Wnt訊號通路中，WB檢測到CircmtCl1的表達與-catenin的磷酸化水平呈負相關。 隨後，Edu、Transwell和傷口癒合試驗結果表明，CircmtCl1增強了TU212和LCC細胞的增殖、侵襲和遷移能力在Si-C1QBP搶救試驗中，CircmtCl1可能以C1QBP依賴性方式靶向Wnt-Catenin通路，並促進LSCC的生物學功能。
為了進一步闡明LSCC細胞中CircmtCl1與C1qbp相互作用的分子機制，作者設計了靶向C1qbp蛋白關鍵結合位點的CircmtCl1野生型和突變型探針，RNA下拉分析表明，只有野生型CircmtCl1（+159+210）探針可以富集內源性C1qbp蛋白。 RIP測試的反面證實了這一點。
接下來，作者進一步驗證了C1qbp--catenin的下游調控模式，發現C1qbp的過表達抑制了-catenin的磷酸化水平，顯著增加了其蛋白表達，並敲低了相反的蛋白表達。 Transwell和轉殖形成試驗表明，C1QBP還可以增殖、遷移和侵襲TU212和LCC細胞，然後CoIP正負向驗證了C1QBP與-catenin之間存在直接相互作用。 綜上所述，C1QBP與LSCC組織中的致癌原-連環蛋白相互作用，啟用circmtcl1介導的Wnt-連環蛋白通路。
在體內驗證CircMTCL1的功能作用時，作者通過皮下注射穩定轉染CircMTCL1 shRNA或對照慢病毒的TU212細胞進行異種移植試驗，結果顯示，降低CircMTCL1的表達可顯著降低TU212細胞的致瘤性，並顯著降低腫瘤體積和腫瘤重量。 將SH-CircmtCl1 TU212細胞注射到尾靜脈中，構建LSCC轉移小鼠模型，敲低CircMTCl1減少肺轉移，與體外細胞實驗一致。
綜上所述，CircmtCl1通過特異性結合序列與C1QBP相互作用，通過泛素-蛋白酶體途徑抑制其降解，增加C1QBP的表達，增強C1QBP與-catenin的相互作用，阻止-catenin的磷酸化，使-catenin在細胞質和細胞核中積累，從而促進細胞在體內和體外的增殖、侵襲和遷移。
資料**： wwwncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/pmc8976408/
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