樣品製備是指在進行實驗或分析之前對樣品執行的一系列處理步驟。 這些步驟旨在製備樣品,以確保其適合後續實驗或分析的要求。 樣品製備的具體步驟可能因實驗型別和樣品型別而異。
多重細胞因子檢測中使用的樣品型別多種多樣,包括血清、血漿、細胞培養上清液、尿液和裂解物。 適當的樣品預處理是確保多重檢測準確性的第一步。 在這裡,小北將介紹幾種不同的常見樣品預運輸方法:
樣品型別
血漿:用含抗凝劑的採血管(推薦EDTA抗凝管)採集血液,兩次離心後取上清液,分裝後冷凍儲存-80。 避免反覆凍融迴圈和用乾冰運輸。
血清:用無抗凝劑(可促進凝血)的採血管(可促進凝血或空管)採集血液,4並靜置2小時(避免休克,防止溶血),兩次離心後取上清液,等分試樣-80後冷凍上清液。 避免反覆凍融迴圈和用乾冰運輸。
組織裂解物:向組織中加入適量的裂解物(裂解液中需加入蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑,20mg組織相當於200-300ul裂解物),用組織勻漿器處理組織勻漿,置於冰箱中(4、30min),兩次離心後取上清液,測定組織裂解物中BCA的總蛋白濃度(推薦濃度不低於1mgml)。 分裝-80後冷凍儲存,用乾冰運輸。
細胞裂解物:收集細胞樣品後,用PBS洗滌,加入適量裂解液(裂解液中需加入蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑,107個細胞對應200UL裂解液),置於冰箱中(4、30min),取上清液離心兩次後,測定BCA總蛋白濃度(推薦濃度不低於1mgml), 等分試樣-80後冷凍,用乾冰運輸。
細胞培養上清液:兩次離心後,取上清液,分裝,-80冷凍,用乾冰運輸。
注意:由於物種間TGF-的高度保守性和動物血清中TGF-的大量,因此在測試細胞培養上清液樣品時應使用無血清培養基。 如果已經將動物血清新增到培養基中,則可以新增基線對照以獲得樣品中TGF-的準確值。
體液(肺泡灌洗液、尿液、滑液、腦脊液、痰液、唾液等)洗鼻等)。:兩次離心後,取上清液,分裝,-80冷凍,用乾冰運輸。
其他樣本(鼻腔分泌物、眼淚、子宮液、**分泌物等)。取好樣品後,將棉籤放入“除底”的小試管中,放入大試管中,立即用等量的生理鹽水或樣品稀釋劑(如100ul)沖洗棉籤,離心後取上清液(最終樣品量不得少於60ul), 等分-80 ul後冷凍,用乾冰運輸。
適用平台
液相微陣列(Luminex)。
Luminex技術以螢光編碼微球為核心,融合了流式細胞術原理、雷射分析、高速數字訊號處理等技術,多指標並行分析,一管可同時準確定量檢測多達2-100種不同的生物分子; 具有高通量、高靈敏度、並行檢測等特點; 可用於免疫測定、核酸研究、酶學分析、受體、配體識別分析等多個方面和領域的研究。
電化學發光(MSD)。
電化學發光是在電極表面通過電化學引發的一種特定的化學發光反應,是電化學和化學發光過程的完美結合。 MSD 電化學發光檢測使用磺基標籤標記物,該標記物在多陣列和多運動微孔板的電極表面通電,然後電化學激發磺基標籤標記物以發射強光。
流式細胞術液相(CBA)。
Cytometric Bead Array(CBA)是一種基於流式細胞術系統的多重蛋白質定量方法,可同時檢測單個樣品中的多個指標。 流式細胞術CBA技術可檢測稀有樣品和小樣品的細胞因子、抗體、抗原等指標。 流式細胞術因其檢測速度快、檢測方法靈活、多指標、多引數、靈敏度高等特點,已成為基礎科學研究和臨床檢測中不可缺少的技術手段。