WB用於檢測蛋白質磷酸化水平

蛋白質磷酸化是細胞中一種關鍵的轉錄後修飾，在許多細胞過程中起著至關重要的調節作用，例如訊號傳導、代謝和基因表達。 因此，蛋白質磷酸化水平的準確檢測已成為生命科學領域的乙個重要研究方向。 其中，Western blot（WB）技術因其高靈敏度和準確性，已成為評估蛋白質磷酸化水平的首選方法。

圖1遠西印跡分析。

WB技術首先需要通過SDS-PAGE對目標蛋白進行電泳分離。 然後將蛋白質轉移到高親和力膜上，例如聚偏二氟乙烯 （PVDF） 或硝酸纖維素膜。 接下來，使用特異性抗體檢測蛋白質。 為了檢測蛋白質的磷酸化水平，研究人員使用靶向特定磷酸化位點的抗體，這允許對蛋白質的磷酸化狀態進行非常特異性的定位和定量。

然而，磷酸化蛋白WB的實驗過程存在一些挑戰。 首先，確保所使用的抗體具有高度特異性至關重要，因為背景訊號或交叉反應性可能會干擾結果。 其次，磷酸化是一種可逆反應，因此在處理和儲存樣品時需要特別小心，以避免人為改變磷酸化水平。 新增磷酸酶抑制劑和快速樣品處理有助於維持樣品的磷酸化狀態。