ACE2重組蛋白的製備和表徵

血管緊張素轉換酶 2 （ACE2） 是一種跨膜蛋白，是腎上腺素轉換酶 II （ACE） 家族的成員。 它是一種含有 805 個氨基酸殘基的蛋白質，具有多個結構域，包括 N 端訊號肽、細胞外區域、跨膜區域和 C 端結構域。 貨號聚α烯酸1000-6875

ACE2主要通過其胞外結構域與血管緊張素II相關的肽分子結合，並將其代謝為血管緊張素1-7，從而在血壓平衡和纖維化甚至炎症反應中發揮重要作用。

ACE2蛋白的製備和表徵是研究其生物學功能和開發相關藥物的關鍵步驟。 通過重組技術製備的ACE2蛋白可用於體外實驗，以模擬與其配體或病原體的相互作用，並進一步揭示其分子機制和生理功能。

2.實驗準備。

第 1 步：轉殖目標序列。

採用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）技術從人肺組織中擴增ACE2基因，利用限制性內切酶將擴增產物與表達載體連線，構建靶ACE2基因的重組表達載體。

第 2 步：轉染宿主細胞。

將重組表達載體轉染到CHO細胞或其他合適的宿主細胞系中，經過篩選擴增，得到穩定表達ACE2蛋白的細胞系。

第 3 步：蛋白質的表達和純化。

將細胞培養至對數生長期，然後加入誘導劑（例如，異丙基-D-硫代半乳糖苷，IPTG）以刺激ACE2基因的表達。 收穫細胞，經超聲破碎和離心後得到含有目標蛋白的細胞裂解物。 使用跟蹤放射免疫沉澱或親和層析等技術純化靶標 ACE2 蛋白。

第 4 步：蛋白質分析和鑑定。

使用 SDS-PAGE、蛋白質印跡或質譜等技術分析純化 ACE2 蛋白的分子量、抗原性和純度。

第 5 步：功能鑑定。

採用細胞結合試驗或酶活性試驗等方法驗證重組ACE2蛋白能否與冠狀病毒相互作用並發揮相關功能。