CDK5重組蛋白調節細胞週期

1.蛋白質基本資訊：

細胞週期蛋白依賴性激酶 5 （CDK5） 是一種絲裂原活化蛋白激酶，參與調節細胞週期和神經發育等生物過程。 它與細胞週期蛋白I結合形成活性複合物。

CDK5 蛋白含有 293 個氨基酸，分子量約為 33 kDa。

2.基因轉殖：

具有全長 CDK5 序列的引物旨在擴增人類的 CDK5 基因。

將擴增的CDK5基因轉殖到表達載體（如PET28A）中，並進行測序驗證。

貨號聚α烯烴1000-5635

3.表達宿主文化：

將CDK5重組質粒轉化為表達大腸桿菌的宿主細菌，如BL21（DE3）。

在無菌條件下，通過挑選單個菌落在培養基（例如，Luria-bertani，LB）中生長並孵育過夜。

4.誘導表達：

將過夜培養液轉移到含有適當濃度的IPTG（異丙基-D-硫代半乳糖苷）的培養基中，並繼續培養4-6小時。

收集細菌溶液，並通過離心沉澱細菌。

5.細胞破碎和蛋白質提取：

細胞沉澱通過超聲處理或其他方式破碎，釋放蛋白質。

使用合適的緩衝液提取CDK5蛋白。

6.親和純化：

提取的蛋白質樣品通過親和層析純化。

CDK5 可以使用親和柱（如鎳柱 （Ni2+））根據標記蛋白的特異性結合進行純化。

7.電泳分析：

使用聚丙烯醯胺凝膠電泳 （SDS-PAGE） 分析純化的 CDK5。

通過Western blot等技術檢測蛋白的純度和表達水平。

8.蛋白質活性分析：

純化的CDK5的酶活性分析可以使用典型的底物匹配激酶反應系統進行。

將 CDK5 活性與參考文獻中的結果進行比較，以驗證重組蛋白的功能。