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胡 金生， 朱濤玉.
介紹。 合成著色劑是給食品著色、改善食品色澤的合成物質[1]，具有色澤鮮豔、效能穩定、成本低廉、著色強度強等特點，廣泛應用於各類食品，如糖果、糕點、蜜餞、飲料、罐頭食品等。 合成著色劑在現代食品工業中發揮著不可或缺的作用，賦予食品豐富的色彩，為消費者提供多種選擇。 然而，隨著人們對食品質量安全的日益關注，生產過程中合成著色劑的濫用和消費過程中的過量攝入等一系列潛在危害也引起了社會各界的廣泛關注和討論。
近日，食品安全國家標準審查委員會審議發布了85項食品安全國家標準，其中《合成著色劑檢測標準——GB 5009》35-2023。
gb 5009.35-2024年新國標變更[2][3].
1. gb 5009.35-2023於2023-09-06正式發布，2024-03-06正式實施;
2. gb 5009.35-2023 代替 GB 500935-2016、gb 5009.141-2016、gb/t 9695.6-2008、gb/t 21916-2008；
3.與 GB5009 相比35-2016，gb 5009.35-2023 加入靛藍、**紅、酸性紅和喹啉黃四種合成著色劑，增加並澄清適用基質的種類，修改樣品製備方法和儀器條件，修改檢出限和定量限。
賽默飛世爾科技新國標解決方案亮點：
1.Thermo Scientific 實驗室使用標準梯度洗脫程式完全重現了該方法，僅將色譜柱溫度提高到 35，以進一步優化靈敏度和分離度
2.檸檬黃和新紅、喹啉黃-5和莧菜紅、喹啉黃-6和胭脂紅、日落黃和喹啉黃-2、酸性紅和喹啉黃-3都可以在基線時分離，進行準確的定性和定量分離
3.酸性紅峰位於Brilliant Blue-1之後，不干擾Brilliant Blue-3的定性定量，分離和保留均優於標準品提供的參考光譜
4.基於 Chromeleon 73.資料處理軟體，採用化合物基團模式，準確定量喹啉黃、亮藍的多種異構體，提高工作效率。
gb 5009.35-2023 賽默飛世爾科技應用解決方案。
01 儀器配置和色譜條件。
液相色譜儀：Vanquish Core HPLC 液相色譜系統，配備 Chameleon 資料處理軟體。
色譜柱：
acclaim 120 c18, 5 μm, 4.6×250 mm (p/n: 059149)
betasil c18, 5 μm, 4.6×250 mm (p/n: 70105-254630)
四元幫浦幫浦：vc-p20-a
流動相：A：20 mM醋酸銨 B：甲醇。
流量：1.0 ml/min
梯度洗脫程式：
自動進樣器模組：VC-A12-A
注射量：10公升;托盤溫度： 15
色譜柱元件：VC-C10-A
柱溫：
檢測器DAD：VC-D11-A（紫外可見光）。
採集波長：415 nm、520 nm、610 nm;
採集頻率：5 Hz;
光譜採集：400-800 nm
02 光譜和資料。
2.1 Acclaim 120 C18 用於分離 11 種合成著色劑。
圖1：11種合成著色劑在415 520 610 nm處的分離疊加（200 μg/ml, 10 μl)
圖2 檸檬黃和喹啉黃在415 nm處的分離光譜和資料（20.）0 μg/ml, 10 μl)
圖3 包括新紅在內的7種合成著色劑在520 nm處的分離光譜和資料（20.）0 μg/ml, 10 μl)
圖4 靛藍和亮藍在610 nm處的分離光譜和資料（20.）0 μg/ml, 10 μl)
2.2 喹啉黃和亮藍異構體的分離。
2.2.1 喹啉黃黃烯的分離。
食品新增劑喹啉黃由2-（2-喹啉基）-1,3-茚銍酮（型）或三分之二的2-（2-喹啉基）-1,3-茚滿酮和1/3的2-[（6-甲基喹啉）]-1,3-茚酮磺化制得。 其中，該型工藝產品的主要成分為2-（2-喹啉基）-茚酮-1,3-二酮二磺酸二鈉鹽（80.）。0%），2-（2-喹啉基）-茚海三啉-1,3-二酮單磺酸鈉鹽（15.）0%），2-（2-喹啉基）-吲哚基-1,3-二酮三磺酸三鈉鹽（7.）0%）、對位染料2-（2-喹啉基）-1,3-茚滿酮和2-[（6-甲基喹啉）]-1,3-茚酮（4.）0%)；工藝產品的主要成分是2-（2-喹啉基）-茚基-1,3-二酮二磺酸二鈉鹽（70.）。0%）、對位染料2-（2-喹啉基）-1,3-茚滿酮和2-[（6-甲基喹啉）]-1,3-茚酮（4.）0%)[4]。由於磺化反應過程中的取代位點不同，存在2-（2-喹啉基）-茚滿基-1,3-二酮二磺酸二鈉鹽qyna2和2-（2-喹啉基）-茚滿基-1,3-二酮單磺酸鈉鹽qyna和qyna兩種異構體[5]。
因此，由於合成和純化工藝的差異，食品新增劑喹啉黃在色譜分離過程中會有多個色譜峰，同一發色團在415 nm處可能有多達7個色譜峰標準喹啉黃通常通過色譜製備純化以除去對位染料，最多可分離5個色譜峰。 如圖5所示，喹啉黃7種組分的譜圖高度相似，新國標標示的喹啉黃4種組分的峰序和保留時間一致，喹啉黃-5 6 7可能是qyna3或對羥基染料組分，由於色譜分離不充分，常被其他相鄰峰包埋在標準混合物中， 然後被忽略。
圖5 喹啉黃原胺在415 nm處的異構體分離光譜（1000 μg/ml, 5 μl)
2.2.2 亮藍色異構體的分離。
食品新增劑亮藍的合成路線是以乙份苯甲醛鄰磺酸和兩份N-乙基-N-（3-磺基苄基）-苯胺為原料縮合氧化制得[6]。 其中，N-乙基-N-（3-磺基苄基）-苯胺由N-乙基-N-苄基苯胺磺化而得，磺化位置主要在其苄基上的間位，其次是對位，鄰磺化較為困難。 由於難以分離，N-乙基-N-（3-磺基苄基）-苯胺的工業產物實際上是三種異構體的混合物，一般大致由間位（m）：對（p）：鄰位（o）=75 85 ： 15 20 ： 0 8組成。 因此，製備的亮藍色商業顏料的主要成分也應是6種異構體的混合物，m-m、m-p、m-o、p-p、p-o和o-o[7]。 雖然O-O和O-P異構體的比例非常低，但市售的純亮藍色液相色譜圖通常顯示4個色譜峰。 如圖6所示，亮藍四種組分的光譜高度相似，亮藍-1 2標記的兩種亮藍組分的峰序數和保留時間與新國標一致，標準中省略了亮藍-3 4，其中亮藍-3可能受到酸性紅的干擾。
圖6 亮藍色異構體在610 nm處的分離光譜（1000 μg/ml, 5 μl)
2.3 11 種合成著色劑標準系列工作液的校準曲線。
圖7 檸檬黃和喹啉黃的線性疊加光譜（0.）20-10.0 μg/ml, 10 μl)
圖8 7種合成著色劑的線性疊加光譜，包括新紅（020-10.0 μg/ml, 10 μl)
圖9 靛藍和亮藍色線性疊加光譜（0.）20-10.0 μg/ml, 10 μl)
2.4 樣品和樣品尖峰光譜。
圖10 維生素功能飲料樣品及其刺突光譜（檢測檸檬黃和胭脂紅）。
圖11 茉莉花茶樣品和樣品尖峰光譜。
2.5 喹啉黃和亮藍異構體的定量。
圖12 使用化合物基團定量的喹啉黃色和亮藍色異構體的示意圖。
tips:想了解更多關於變色龍軟體的化合物基團定量操作細節嗎？與 Thermo Scientific LC 應用團隊交談。
2.6 Betasil C18 用於分離 11 種合成著色劑（補充方案）。
圖 13 BETASIL C18 應用於 11 種合成著色劑的分離光譜 （20.）0 μg/ml, 10 μl)
03 gb 5009.35-2023 色譜耗材相關建議。
參考文獻： 1] GB 500935-2023 食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定.
2] gb 5009.35-2016食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定.
3] GB 2760-2014《食品安全國家標準 食品新增劑使用標準》。
4] gb 1886.104-2015食品安全國家標準 食品新增劑 喹啉黃。
5] DBS32 012-2016 食品安全檢測中喹啉黃的地方標準 高效液相色譜、液相色譜-質譜質譜聯用。
6] gb 1886.217-2016食品安全國家標準 食品新增劑亮藍。
7]丁秋龍，王立斌，陳建新.食用亮藍色顏料的同構體研究。
液相色譜儀：