猴子轉錄啟用劑-5(ATF-5)酶聯免疫檢測試劑盒的實驗原理和操作步驟。
1.實驗原理。
Monkey Activator of Transcription-5 (ATF-5) ELISA Kit 使用間接酶聯免疫測定 (ELISA) 通過抗原和抗體的特異性結合反應來捕獲和檢測待測樣品中的 ATF-5。 將ATF-5抗體包被在微孔板上,樣品中的ATF-5與包被的抗體結合,加入酶標記的ATF-5抗體形成免疫複合物。 洗滌後,加入底物顯色溶液,並通過酶催化反應顯色。 最後,用酶標儀測定光密度值,計算待測樣品中ATF-5的濃度。
2. 步驟。
1.準備試劑和材料:猴子轉錄啟用劑-5(ATF-5)酶聯免疫檢測試劑盒、微孔板、洗滌液、樣品稀釋劑、移液器、實驗室外套、手套、面罩、記錄筆等。
2.樣品處理:根據試劑盒說明書的要求,對待測樣品進行適當稀釋,並加入等量的樣品稀釋液。
3.分液:使用移液管將稀釋的樣品新增到板上的適當孔中,並按照試劑盒說明要求的給藥順序和量進行操作。
4.孵育:將微孔板密封並在37下孵育一定時間,使抗原和抗體充分結合。
5.洗滌:按試劑盒說明書要求洗牌板一定次數,以去除未結合的抗原、抗體和雜質。
6.酶標記抗體:使用移液管將酶標記抗體新增到板上的相應孔中。
7.再孵育:將板密封並在 37 下再次孵育一段時間,以使酶標記的抗體與抗原-抗體複合物結合。
8.洗滌:按照試劑盒說明的要求再次清洗板一定次數,以去除未結合的酶標記抗體和雜質。
9.新增底物顯色劑:使用移液管將底物顯色劑新增到板板上的適當孔中。
10.顯色:將板在室溫下放置一定時間,並觀察到明顯的顏色變化。
11.停止反應:使用移液管將終止溶液新增到板上的適當孔中,以停止顯色反應。
12.光密度值的測定:使用酶標儀測定每個孔的光密度值,並記錄資料。
13.資料處理和結果分析:根據試劑盒說明中提供的公式或圖表,將光密度值轉換為 ATF-5 的濃度。 進行資料分析得出實驗結論。
需要注意的是,本實驗操作規程僅供參考,具體操作應按試劑盒說明書的要求進行。 同時,在實驗過程中要保持實驗室的清潔衛生,遵守實驗室安全規定,防止交叉汙染和事故。