中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準
sn/t 5649-2023
呋喃丹和動物源性食品中的代謝物羥基硫丹殘留物的測定
液相色譜質譜質譜
determination of carbofuran and its metabolites residues 3-hydroxycarbofuran in foods of animal origin—lc-ms/ms method
以前的話
本檔案符合GB T 11-2020 《標準化工作指南 第一部分：標準化檔案的結構和起草規則》。
請注意，本文件的某些內容可能與專利有關。 本檔案的簽發人不承擔識別專利的責任。
本檔案由中華人民共和國海關總署提交並集中。
本檔案起草單位：中華人民共和國廣州海關、中華人民共和國南寧海關、中華人民共和國拉薩海關、中華人民共和國合肥海關。
本檔案主要起草人：習靜、李菊、李天勇、曹曉剛、徐娟、司璐璐、宋偉、吳淑嶽。
範圍
本檔案規定了測定動物源性食品中呋喃丹和代謝物3-羥基呋喃丹殘留物的液相色譜-質譜法。
本檔案適用於動物組織、雞蛋、牛奶、蜂蜜、蜂王漿、蜂膠和腸衣中呋喃丹殘留物和代謝物3-羥基呋喃丹的測定。
規範性參考文獻
以下檔案的內容通過正文中的規範性引用構成本檔案的基本規定。 其中，註明了帶有日期的參考文件，並且只有與該日期對應的版本適用於該文件; 對於未註明日期的參考文獻，文件的最新版本（包括所有變更通知單）適用於此文件。
GB T 6682 分析實驗室用水規範和試驗方法。
術語和定義
本文件中沒有需要定義的術語和定義。
操作方法摘要
用乙腈提取樣品中殘留的呋喃丹和3-羥基呋喃丹，分散固相萃取純化，液相色譜-質譜檢測，外標法定量。
試劑和材料
除另有說明外，所用試劑為分析純度，試驗用水應符合GB T 6682規定的一級水。
5.1 乙腈：色譜純。
5.2 甲醇：色譜純度。
5.3 甲酸：色譜純度。
5.4 氫氧化鈣。
5.5 無水硫酸鎂：在500馬弗爐中烘烤約4h，冷卻後存放在密閉容器中備用。
5.6 氯化鈉。
5.7 檸檬酸鈉二水合物。
5.8 檸檬酸二鈉-倍半水合物。
5.9 甲酸銨：高階純度。
5.10 5 MMOLL L 甲酸銨-01%甲酸水溶液：稱取0314 5 g甲酸銨在小燒杯中，加少量水溶解後轉移至1 000ml容量瓶中，精密加甲酸1ml，用水稀釋至刻度，混勻。
5.11 0.5%氫氧化鈣溶液：稱取5g氫氧化鈣，充分溶解並用水稀釋至1 000ml，濾過濾液，準備立即使用。
5.12克百威參考物質（C12H15NO3，CAS號1563-66-2）：純度98%。
5.13 3-羥基克卡硫丹參考物質（C12H15NO4，CAS號16655-82-6）：純度98%。
5.14克百威標準儲備溶液，1 000毫克公升。 精密稱取呋喃丹標準品10mg，加少量甲醇溶解，轉移至10ml容量瓶中，用乙腈定容，搖勻，-18避光儲存，保質期為6個月。
5.15 3-羥克羧化物標準儲備液，1 000 mg l。 精密稱取3-羥克克卡硫丹標準品10mg，加少量甲醇溶解後，轉移至10ml容量瓶中，用乙腈定容，搖勻，-18避光儲存，保質期為6個月。
5.16.混合標準中間溶液：測量1ml標準儲備溶液（5。14 對 515）、用乙腈稀釋，定型至10ml，與濃度等於100的標準中間體溶液混合0 mg L，-18 避光儲存，保質期為 1 個月。
5.17.混合標準工作溶液：準確量量混合適量的標準中間溶液（516） 空白基質稀釋至 0001 mg/l、0.002 mg/l、0.005 mg/l、0.010 mg/l、0.020 mg/l、0.050 mg l 和 0100 mg L 標準工作溶液，濃度為一系列，即用型。
乙 二 胺-n-丙基矽烷基化矽膠（psa）：粒徑m~60m
十八烷基矽烷鍵合矽膠（c18）：粒徑m~60m
5.20 微孔膜： 022 m，有機相。
儀器裝置
6.1.液相色譜-質譜質譜：配備電噴霧離子源（ESI）。
6.2.電子天平：電感為001 g 和 01 mg。
6.3 組織泥瓦匠。
6.4 均質機：10 000 r/min.
6.5個振動台。
6.6 渦旋混合器。
6.7支移液器：100 L 1 000 L。
6.8.離心機：4 000轉以上
6.9 高速冷凍離心機：12 000 rmin.
6.10 超聲波清洗機。
6.11 吹氮器。
標本的製備和儲存
7.1 牛肉、雞肉、豬肝、羅非魚、雞蛋、豬油。
取樣品中具有代表性的可食用部分500克，用紙巾母製成品搗碎，充分混合，放入乾淨的容器中。 密封並標記並儲存在-18以下。
7.2 蜂蜜。
取代表性試樣500 g，攪拌均勻，對於有結晶沉澱的樣品，將試樣置於密閉狀態下不超過60°C的水浴中，待試樣全部熔化後攪拌均勻，迅速冷卻至室溫。 融化時，應注意防止水分揮發，並將其放入乾淨的容器中。 密封並標記好，並在室溫下避光儲存。
7.3 牛奶，蜂王漿。
取代表性樣品500克，攪拌均勻，放入乾淨的容器中，密封並標記，並儲存在-18以下。
7.4 蜂膠。
取代表性樣品500克，冷凍-20年，然後在紙巾母中搗碎，充分混合，放入乾淨的容器中。 密封並標記並儲存在-18以下。
7.5 豬腸衣。
取500克代表性樣品，用剪刀剪成5公釐或更小的長度，用紙巾母搗碎，充分混合，放入乾淨的容器中。 密封並標記並儲存在-18以下。
檢測步驟
8.1 樣品提取。
8.1.1 牛肉、雞肉、羅非魚。
稱取 5 g 試樣（精確到 0.）。01 g）置於50 ml離心管中，加入乙腈10 ml，用均質機以10 000 r min勻漿20 s 30 s，然後取10 ml乙腈清洗均質機刀頭上的殘渣，混合乙腈提取物後，在渦旋混合器中混合提取20 s 30 s， 和4g無水硫酸鎂，1g氯化鈉，1g檸檬酸鈉二水合物，05g檸檬酸二鈉-倍半水合物，充分混合，置振盪萃取中10分鐘，以4 000r min離心5分鐘，取出1ml上清液純化。
8.1.2 豬肝、牛奶、豬油和豬腸衣。
稱取 5 g 試樣（精確到 0.）。01g）在50ml離心管中，加入10ml乙腈，渦旋混合並充分混合20秒30秒，加入4 g無水硫酸鎂1 g氯化鈉1 g檸檬酸鈉二水合物0.5 g檸檬酸二鈉鹽倍半水合物混合後，放入振盪器中10分鐘，以4 000 r分鐘離心5分鐘，取出1ml上清液進行純化（豬脂肪提取上清液在-18下冷凍1小時，除去冷凍脂肪）。
8.1.3個雞蛋，蜂蜜，蜂王漿。
稱取 5 克雞蛋、2 克蜂蜜和蜂王漿（精確到 0.）。01g），放入50ml離心管中，加入5ml水，渦旋混合器混合1分鐘，靜置5分鐘。 加入乙腈10ml，渦旋混合1分鐘，在振盪器上提取10分鐘，加入2g和3g氯化鈉渦旋混合1分鐘，以4 000r分鐘離心5分鐘，取出1ml上清液進行純化。
8.1.4 蜂膠。
權重 02 g 試樣（精確到 0.）。001g）在50ml離心管中，加入10ml乙腈，渦旋混合1分鐘，置超聲清洗器提取10分鐘，加入10ml05%Ca（OH）2水溶液，渦旋混勻2min，然後加入4g 6g氯化鈉，渦旋混合2 min，在0條件下以10 000r min離心10 min，取4ml上清液純化。
8.2 淨化。
8.2.1 牛肉、雞肉、羅非魚、豬肝、牛奶、豬油、豬腸衣、雞蛋、蜂蜜、蜂王漿。
拿1.3.將待淨化的液體分別轉移到內容物中150 mg無水硫酸鎂50 mg psa跟50 mg c18塑料離心管，渦旋並充分混合1分鐘，以12 000r min離心5分鐘，取上清液超過0用於LC-MS質譜的22 M有機相微孔膜。
8.2.2 蜂膠。
拿 81.4.將所有待純液體轉移到裝有除水劑和純化物料（每ml待純溶液150mg無水硫酸鎂、50mg PSA和50mg C18）的塑料離心管中，渦旋混合，然後以12 000 rmin離心5 min。 精密地將2ml上清液移入氮氣吹管中，加入1ml乙腈，在45水浴中吹氮後立即復溶至乾燥，渦旋並充分混合用於LC-MS質譜的22 M有機相微孔膜。
8.3 空白基質提取物。
通過進行試驗確定沒有被測成分的試樣，並將試樣壓成 81 和 82 次操作得到空白基質提取物。
8.4 測定。
8.4.1 液相色譜條件。
由於測試結果取決於所使用的儀器，因此無法給出液相色譜分析的一般引數。 設定的引數應保證在色譜分析時，被測組分能與其他組分有效分離，並給出以下引數供參考。
LC參考條件如下：
a） 列：c18列150 mm2.1 mm（內徑）、粒徑m或同等學歷;
b）流動相：a：甲醇;B：5 mmoll 甲酸銨-01%甲酸水溶液，梯度洗脫，洗脫程式見表1;
c） 流量：03 ml/min；
d） 注射量：2 l;
e） 柱溫：45;
8.4.2 質譜條件。
質譜條件如下：
a） 電離方式：電噴霧電離（ESI）;
b） 護套氣 （kpa）： 24132；
c） 輔助氣體 （kpa）： 6895；
d） 吹掃氣體 （kpa）： 689；
e） 離子傳輸管溫度 （ ） 350;
f） 蒸發溫度 （ ） 300;
g） 掃瞄方式：正離子;
h）監測方式：多反應監測法（MRM）;
i） 定量和定性離子對以及碰撞能 （EV） 如表 2 所示。
8.4.3 繪製標準工作曲線。
按照 8 取空白樣品1 和 82 處理。 在所得樣品溶液中，將呋喃丹和3-羥基呋喃與標準中間溶液（516）注入稀釋制得的混合標準工作液，按濃度從低到高的順序進行檢測，以定量離子峰面積為縱坐標，以標準工作液濃度為橫坐標繪製標準工作曲線。
8.4.4 定性測定。
關注 84.1 和 84.2.如果待測物質在樣品中的保留時間與標準工作溶液一致，則保留時間偏差為2在5%以內，且定性離子對的相對豐度（表示為強度相對於最強離子豐度的百分比）與濃度相當的標準工作溶液的相對豐度一致，相對豐度的允許偏差不超過表3的規定，各離子的訊雜比為3， 然後可以判斷樣品中的相應分析物。
8.4.5 定量測定。
對於標準工作溶液和樣品溶液的相同體積注射測定，待供試樣品溶液中呋喃丹和3-羥基呋喃丹的響應值應在標準曲線的線性範圍內，如果超過線性範圍，應在注射分析前稀釋。 關於呋喃丹和3-羥基硫丹物質的資訊見表A1.呋喃丹和3-羥基呋喃的多反應監測色譜圖見圖B1 和圖 b2。
8.5 空白測試。
除非稱量樣品外，均遵循上述步驟。
計算結果和演示
採用外標法定量，用色譜資料處理軟體或按式（1）計算樣品中呋喃丹和3-羥基呋喃丹的殘留量，從計算結果中扣除空白值。
式中：x——樣品中呋喃丹和3-羥基呋喃丹殘留物的量，單位為毫克/千克（mg kg）;
c - 從標準工作曲線獲得的樣品溶液中測量組分的濃度，單位為微克/毫公升（g ml）;
v - 樣品溶液的最終體積，單位為毫公升（ml）;
m - 最終樣品溶液所代表的樣品質量，單位為克 （g）。
呋喃丹殘留物在GB 2763中定義為呋喃丹和3-羥基呋喃丹的總和，以呋喃丹表示。 因此，根據公式（2）計算樣品中呋喃丹的總殘留量：
其中：x總計 - 樣品中的總殘留物，以呋喃丹克數克表示，單位為毫克/千克（mg kg）;
X克呋喃丹 - 樣品中呋喃丹殘留的量，單位為毫克/公斤（mg kg）;
x3-羥基呋喃丹 - 樣品中3-羥基呋喃丹的殘留量，單位為毫克/千克（mg kg）;
0.93 – 3-羥基呋喃丹與呋喃丹的係數。
計算結果保留兩個有效數字，當含量超過1 mg kg時保留三個有效數字。
定量限
牛奶中呋喃丹和呋喃丹3-羥基呋喃丹的定量限為0001 mg/kg；蜂膠中呋喃丹和呋喃丹3-羥基呋喃的定量限為005 mg/kg；牛肉、雞肉、肝臟、羅非魚、雞蛋、蜂蜜、蜂王漿、脂肪和腸衣中呋喃丹和呋喃丹3-羥基硫丹的定量限值為001 mg/kg。
11 **速率和精度。
該方法對牛肉、雞肉、豬肝、羅非魚、雞蛋、蜂蜜、蜂王漿、蜂膠、牛奶、豬油和豬腸衣基質進行了測試，不同基質中不同新增水平下**率的資料和精密度見附錄C表C1。
*從：