氧化磷酸化檢測技術

氧化磷酸化是線粒體在細胞呼吸鏈中產生ATP（三磷酸腺苷）的過程，是細胞能量代謝的關鍵步驟。 在這個過程中，電子通過一系列氧化還原反應從乙個載流子轉移到另乙個載流子，最終轉移到氧氣，形成水。 該電子傳輸過程產生的能量用於將磷酸基團轉移到 ADP（二磷酸腺苷）以產生 ATP。

1、檢測方法：

1.光譜法：通過測量線粒體呼吸鏈中某些成分的吸收或螢光光譜的變化來評估氧化磷酸化的效率。

2.放射性標記：使用放射性標記的磷酸鹽，通過測量氧化磷酸化嵌入ATP的程度來評估氧化磷酸化。

3.ATP 產量測定：直接測量細胞或線粒體製備中產生的 ATP 量。 這可以通過各種生化方法實現，例如使用ATP依賴性酶促反應。

4.耗氧率 （OCR） 測定：使用 Seahorse XF 分析儀等裝置測量細胞的耗氧率，以間接評估氧化磷酸化的效率。

5.螢光探針：特異性螢光探針用於監測線粒體膜電位的變化，這與氧化磷酸化的效率密切相關。

2.應用：

1.生物能量學研究：了解細胞能量代謝的基本原理。 2.疾病機制：研究各種疾病（例如神經退行性疾病、癌症）中氧化磷酸化的改變。 3.藥物篩選和毒性測試：評估藥物對線粒體功能的影響。 三、注意事項：

1.樣品處理：需要精確的樣品處理以保持線粒體的完整性。 2.實驗條件：實驗條件（如溫度、氧氣濃度）對結果有顯著影響。

圖1磷酸化定量蛋白質組學分析工作流程。