蛋白磷酸化檢測技術

蛋白質磷酸化是細胞內重要的訊號轉導機制，參與許多細胞功能，如生長、死亡和反應。 磷酸化蛋白在細胞訊號傳導中起關鍵作用。 因此，研究蛋白質磷酸化對於了解細胞生物學和疾病進展非常重要。

圖1酸化定量蛋白質組學分析工作流程。

蛋白質磷酸化的測定通常使用以下方法進行：

1.放射性標記方法：

-32P ATP 通常用作放射性磷酸鹽供體，在蛋白激酶的催化下，使目標蛋白磷酸化。 然後，通過輻射測定法檢測蛋白質磷酸化水平。

2、western blotting：

使用對特定磷酸化位點具有特異性的抗體進行檢測。 首先，通過SDS-PAGE電泳分離蛋白質樣品，然後轉移到PVDF或硝酸纖維素膜上，然後用特異性磷酸化抗體進行檢測。

圖2遠西印跡分析。

3.質譜：

蛋白質或肽的質譜分析可以精確測定蛋白質磷酸化的位點和程度。 常用的技術包括液相色譜串聯質譜（LC-MS）。

4. Phos-tag凝膠電泳：

phos-tag 是一種與磷酸化位點結合的化合物。 在磷酸標籤 SDS-PAGE 中，磷酸化蛋白在凝膠中的移動速度更慢，與非磷酸化蛋白分離。

5. ELISA（酶聯免疫吸附測定）：

使用磷酸化特異性抗體，可以構建 ELISA 實驗以確定樣品中磷酸化蛋白的水平。

6.流式細胞儀：

磷特異性抗體和螢光標記使流式細胞術能夠在單細胞水平上分析蛋白質磷酸化。

在選擇蛋白質磷酸化測定方法時，應考慮樣品的性質、所需的靈敏度和解像度、可用的儀器以及實驗的預期目標。