尋找在腫瘤細胞上表達而在正常細胞上不表達或表達不足的靶點對於腫瘤免疫至關重要。 Ror1是乙個非常有前途的藥物靶點，它在多種實體瘤和血液系統惡性腫瘤中具有分化高表達，但在**健康組織中不表達。 這意味著Ror1有望成為具有廣譜抗癌潛力的新藥物靶點。
受體酪氨酸激酶樣孤兒受體 1 （ROR1） 是一種 I 型跨膜蛋白，屬於受體酪氨酸激酶樣孤兒受體 （ROR） 家族。 該家族之所以得名，是因為它的配體多年來一直沒有被認可。 現在已知 Ror 家族成員是 Wnt 家族訊號分子 Wnt5A B 和 Wnt16 的受體，其中 Wnt5A 是主要配體。
如下圖所示，Ror1是一種單次跨膜受體，由細胞外、跨膜和細胞內三個主要部分組成。 細胞外區（ECD）可進一步分為三個結構域：免疫球蛋白樣結構域（IG-like）、捲曲結構域（FZD）和環狀結構域（KD）。 FZD 與配體 WNT5A 結合以調節非經典 WNT 訊號轉導。 川崎病介導 Ror1 與其他受體（如 Ror2）的相互作用。 細胞內結構域 （ICD） 包含乙個酪氨酸激酶樣結構域、兩個富含絲氨酸的蘇氨酸結構域和乙個富含脯氨酸的結構域。
figure 1 the structure of ror1[1]
Ror1在胚胎早期發育中高度表達，可參與細胞**的調節、增殖和遷移活動，以及神經、骨骼和血管等器官的產生。 隨著胎兒的進展，Ror1的表達逐漸降低。 在兒童期和**期，Ror1在幾乎所有正常組織中表達低或無表達。 相比之下，ROR1 在多種癌症中表達，包括血液系統癌症，如慢性淋巴細胞白血病 （CLL）、套細胞淋巴瘤 （MCL） 和實體瘤（卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、黑色素瘤和結直腸癌等）。 Ror1 的表達特性使該蛋白成為癌症的理想藥物靶標**。
研究表明，Ror1在腫瘤細胞中的高表達有助於提高腫瘤細胞的存活率，促進腫瘤細胞的增殖、遷移和趨化性。 表達 Ror1 的血液腫瘤和實體瘤具有很高的自我更新潛力，表現出更高的生存率和遷移率，並且與預後不良相關。
Wnt5A-Ror1 通過非典型 Wnt 通路參與並上調 YAP TAZ 轉錄和/或多梳復合蛋白 BMI-1 的表達，在腫瘤發生和耐藥性中起重要作用。 WNT5A 與 Ror1 結合誘導細胞內訊號傳導，啟用 AKT，然後磷酸化 BMI-1，促進基因組不穩定、癌細胞增殖和耐藥性。 與 Ror1 FZD 複合物結合後，Wnt5A 通過 G1213 結合啟用 RHOA，抑制 LAT122 活性，導致 YAP TAZ 去磷酸化和核易位。 YAP TAZ 與 TEADS 結合以誘導幹細胞和腫瘤發生相關基因的轉錄。 YAP TAZ 轉錄的增加反過來又上調了 Ror1 的表達。
figure 2 ror1 signaling pathway and tumor [2]
目前正在開發的針對 Ror1 的基於抗體的免疫**包括 RoR1 單轉殖抗體、抗體-藥物偶聯物 （ADC）、雙特異性抗體 （BITES） 和嵌合抗原受體 （CAR） T 細胞。 當然，除了免疫**，還有靶向ROR1的小分子抑制劑，這裡我們重點介紹靶向ROR1免疫**的臨床研究進展。
3.1 抗體-藥物偶聯物 （ADC）。
ADC是一種靶向**藥物，通過化學連線子將小的細胞毒性分子與單轉殖抗體偶聯。 抗體-藥物偶聯物選擇性地將有毒物質遞送至抗原陽性癌細胞。
zilovertamab vedotinvls-101
zilovertamab vedotin的原始公司是velosbio，該公司於2024年11月5日獲得默克公司的批准，有275億美元收購。 Zilovertamab vedotin 是一種靶向 Ror1 的 ADC 藥物，通過靶向 Ror1 的蛋白水解可切割接頭與單甲基 auristatin E （MMAE） 偶聯。 MMAE是一種通過阻斷微管蛋白聚合來抑制細胞的藥物，MMAE的最高研發狀態——ADC zilovertamab vedotin的“群體寵物”毒素容量目前處於III期，平均DAR為4，用於血液系統惡性腫瘤和實體瘤患者。 在 2023 年 ASH 會議上，默沙東披露了 zilovertamab vedotin*** 或難治性瀰漫性大 B 細胞淋巴瘤 （DLBCL） 的 2 期 W**eline-004 研究的最新結果。 在更新的W**eline-004結果中，zilovertamab vedotin在R r DLBCL患者中仍顯示出具有臨床意義的抗腫瘤活性。 這些患者主要是在自體幹細胞移植 （ASCT） 或嵌合抗原受體 （CAR-T） 細胞**後進展的 Rr DLBCL 患者，或者不符合 ASCT 和/或 CAR T 細胞**，** 的選擇有限。 zilovertamab vedotin 的安全性是可控的，並且與已知的含 MMAE 的藥物一致。
lcb71 (cs5001)
LCB71最初由南韓兩家生物製藥公司Legochem Biosciences和ABL Bio開發，預付款1000萬美元+3引入LCB71的里程碑金額為535億美元。 LCB71 是一種由靶向 Ror1 的人單轉殖抗體組成的 ADC。 目前，開發的最高階段是I期，靶向包括實體瘤和血液系統惡性腫瘤在內的適應症。
該ADC藥物具有獨特的設計，其中LCB71通過定向偶聯技術結合了獨特的葡萄糖醛酸連線物和吡咯苯並二氮雜卓（PBD）原毒素二聚體。 接頭和原生毒素都可以被溶酶體-葡萄糖醛酸酶切割，溶酶體-葡萄糖醛酸酶在許多癌細胞中過表達。 結果，LCB71在到達腫瘤後才被其接頭切割以釋放PBD原毒素，然後在腫瘤細胞內啟用PBD原毒素，從而殺死腫瘤細胞。 這種接頭加原毒素的“雙控”機制有效解決了傳統PBD負載的典型毒性問題，具有更好的安全性。
LCB71的多區域I期臨床試驗已在美國和澳大利亞取得進展，劑量遞增，並顯示出良好的安全性和耐受性。 2024年4月24日，基石藥業宣布已完成LCB71中國多區域I期臨床試驗的首例患者入組。 基石藥業首席執行官楊杰博士表示：“這標誌著我們的管線20 戰略的另乙個里程碑。 隨著中國研究中心的加入，這一重要專案的步伐將進一步加快。
nbe-002
NBE-002最初由NBE-Therapeutics開發，2024年12月10日，勃林格殷格翰宣布以約15億美元**收購NBE-Therapeutics，從而產生NBE-002。 NBE-002 是一種由新型抗人 Ror1 單轉殖抗體 XBR1-402 和蒽環類藥物 PNU-159682 衍生物組成的 ADC。 HUXBR1-402是一種通過噬菌體展示從兔抗體庫中篩選出來的兔-人嵌合單轉殖抗體。
NBE-002在乳腺癌、肺癌、卵巢癌和肉瘤的患者來源的異種移植模型中顯示出顯著的抗腫瘤活性。 該藥物目前正在美國進行一項針對晚期實體瘤患者的首次人體1-2期研究，旨在評估NBE-002的推薦劑量、安全性、耐受性、抗腫瘤活性、免疫原性、藥代動力學和藥效學，用於晚期實體瘤患者的進一步臨床開發。
3.2 個用於 ROR1 的 CAR-T 細胞**。
構建靶向 Ror1 的 CAR-T 細胞**也可以在靶向殺傷 Ror1 陽性癌細胞中發揮作用。
lyl-797
LYL-797 是由 Lyell ImmunoPharma 開發的靶向 ROR1 的 CAR-T 細胞**，它結合了遺傳和表觀遺傳重程式設計技術 GEN-R 和 EPI-R，以克服實體瘤中 CAR-T 細胞**的屏障。 ROR1 特異性 CAR 包含源自 R12 兔單轉殖抗體的單鏈可變片段 （SCFV），該單鏈可變片段可高度特異性識別人 Ror1 並與之結合。
Gen-R 是一種體外基因重程式設計技術，可設計 CAR-T 細胞過表達 C-Jun。 啟用蛋白1（AP-1）的失調與CAR-T細胞耗竭有關，研究表明，C-Jun的過表達可以使CAR-T細胞不易耗竭，從而增強血液系統惡性腫瘤和實體瘤臨床前模型的抗腫瘤療效和永續性。 EPI-R是一種專有的、優化的製造工藝，可保持T細胞產品的幹細胞表型和功能。 在臨床前研究中，與傳統的ROR1 CAR-T細胞相比，使用GEN-R和EPI-R重程式設計的lyl797細胞在Ror1+腫瘤細胞存在下顯示出更好的功能活性[3]。
LYL797-101目前正在進行I期臨床試驗（NCT05274451），以評估LYL797在ROR1+三陰性乳腺癌（TNBC）和非小細胞肺癌（NSCLC）中的安全性、藥代動力學（PK）和抗腫瘤活性。
prgn-3007
PRGN-3007 是由 Precigen 基於非病毒 UltraCAR-T** 平台生成的多基因自體 CAR-T 細胞。 PRGN-3007 使用單個多基因轉座子質粒進行工程改造，以共表達靶向 ROR1 嵌合抗原受體、膜結合白細胞介素-15 （MBL15）、控制開關的新型機制基因表達，並使用睡美人平台 （SB 系統） 內在阻斷 PD-1 基因表達。 目前，PRGN-3007正在美國進行ROR1+血液系統惡性腫瘤和實體瘤的1 1B期臨床試驗，以測試該藥物的耐受性。
onct-808
ONCT-808 是由 Oncternal Therapeutics， Inc. 開發的靶向 Ror1 的自體 CAR-T 細胞**，目前正處於 1 2 期臨床試驗 （NCT05588440） 中，用於治療 *** 或難治性**侵襲性 B 細胞淋巴瘤患者，包括之前 CD19 CAR T** 失敗的患者。 該臨床試驗旨在評估 ONCT-808 在侵襲性 BCL 患者中的安全性和有效性。 該研究包括兩個不同的階段：I 期劑量遞增和 II 期劑量遞增，目前處於入組狀態。
3.3種雙特異性抗體。
nvg-111
NVG-111是Novalgen公司開發的人源化Ror1和CD3位，是由Ror1和CD3的SCFV串聯而成的雙特異性抗體。 NVG-111靶向RoR1陽性惡性細胞，利用T細胞的內在細胞毒性作用，從而誘導體內外腫瘤細胞死亡。 臨床前研究表明，NVG-111在CLL和實體瘤中具有良好的T細胞介導的細胞毒性。 Novalgen公布了NVG-111在2024年ASH的I期首次人體劑量遞增研究結果。 已發表的資料為選擇性靶向 Ror1 的 TCE 提供了臨床概念證明，即使在已知 T 細胞功能障礙的 CLL 患者中也提供了具有持久反應的抗腫瘤活性的客觀證據。 安全性與作用機制是一致的。
emb-07
EMB-07是由EPIMAB開發的靶向Ror1和CD3的T細胞重定向雙特異性抗體。 EMB-07是一種基於岸邁生物專有的FIT-IG（Fabs-In-Tandem免疫球蛋白）技術的雙特異性抗體。 EMB-07與腫瘤細胞表面的TAA結合，募集並啟用表達CD3的T淋巴細胞，從而促進T淋巴細胞的細胞毒性。 在臨床前試驗中，EMB-07顯示出巨大的療效和安全性潛力。 目前處於**淋巴瘤的I期。
3.4 四特異性抗體。
GNC-035是Systimmune開發的八價四特異性抗體，靶向PD-L1 CD3 4-1BB Ror1，目前處於I期臨床試驗階段。 Systimmune 在 2023 年 AACR 上公布了 GNC-035 的臨床前結果，證明了 GNC-035 在腫瘤微環境中介導 RR1+ 癌症消退、克服基於 TCR 的免疫逃避和逆轉 T 細胞免疫抑制的潛力 [4]。
3.5.單轉殖抗體藥物。
Zilovertamab（原名Cirmtuzumab或UC-961）是Oncternal Therapeutics開發的靶向Ror1的單轉殖抗體藥物，當它與Ror1結合時，阻斷WNT5A訊號傳導，從而抑制腫瘤細胞增殖、遷移和存活，誘導腫瘤細胞分化。
Oncternal Therapeutics已在zilovertamab聯合imbruvica**MCL和慢性淋巴細胞白血病（CLL）和邊緣區淋巴瘤（MZL）患者的1-2期臨床研究中進行了評估（NCT03088878）。 此外，zilovertamab 還有兩項正在進行的臨床試驗，一項是 zilovertamab 聯合 BCL-2 抑制劑 venetoclax**r r cll （NCT04501939） 的 2 期臨床試驗。另一項是zilovertamab聯合多西他賽***治療轉移性去勢抵抗性前列腺癌（NCT05156905）的1B期臨床試驗。
2024年4月，鑑於布魯頓酪氨酸激酶抑制劑（BTK抑制劑）業務格局的快速變化，Oncternal Therapeutics宣布戰略優先調整，Zilo-301聯合伊布替尼的3期研究和CIRM-001*的1期研究將結束，以將公司的現金跑道延長至2024年，並專注於ONCT-808和ONCT-534的臨床開發。 公司強調，該決定並非基於對zilovinatomab安全性或有效性的任何擔憂。
DMA是一家專注於為成藥靶點提供臨床前研發產品和服務的生物科技公司，擁有創新的功能性膜蛋白開發、單B細胞先導抗體發現、抗體工程和功能驗證平台。 DMA現在為ROR1靶點提供全方位的產品和服務，包括各種活性蛋白、抗流單轉殖抗體和參比抗體。 服務內容涵蓋人源化、親和力成熟、PTM風險位點去除等。 此外，為了加速Ror1靶向藥物的開發，DMA還為Ror1準備了B細胞種子庫，最快可在20天內完成先導抗體分子的篩選。
重組活性蛋白。
human ror1 protein, his tag (pme100399)
figure 3. validation data of purified human ror1 protein, his tag (pme100399). human ror1 protein, his tag on sds-page (left); ror1 protein (pme100399) can bind anti-ror1 neutralizing antibody (bme100073) in a linear range of 0.64-16 μg/ml (right).
更多重組活性蛋白：
human ror1(838-937) protein, hfc tag ( pme101444)
human ror1 (312-391) protein, hfc tag ( pme100630)
mouse ror1 protein, his tag (pme-m100069)
重組兔單轉殖抗體。
anti-ror1 antibody(dm149); rabbit mab (dme100149)
figure 4. validation data of anti-ror1 antibody (dme100149); human ror1 protein (pme100399) can bind rabbit anti-ror1 monoclonal antibody (dme100149) in a linear range of 1-50 ng/ml (left); flow cytometry analysis with anti-ror1 (dme100149) on expi293 cells transfected with human ror1 (blue histogram) or expi293 transfected with irrelevant protein (red histogram), and isotype antibody on expi293 transfected with irrelevant protein (orange histogram) (right).
ELISA &fc 驗證參比抗體。
anti-ror1(nbe 002 biosimilar) mab (bme100191)
figure 5. validation data of anti-ror1(nbe 002 biosimilar) mab (bme100191); anti-ror1(nbe 002 biosimilar) mab (bme100191) can bind anti-ror1(nbe 002 biosimilar) mab (bme100191) in a linear range of 0.64–16 ng/ml (left); flow cytometry analysis with 1μg/ml anti-ror1(nbe 002 biosimilar) mab (bme100191) on expi293 cells transfected with human ror1 protein (blue histogram) or expi293 transfected with irrelevant protein (red histogram),and isotype antibody on expi293 transfected with irrelevant protein (orange histogram) (right).
更多 參考抗體：
anti-ror1 (zilovertamab biosimilar) mab (bme100073)
參考資料： 1]趙**張登陽， 郭瑤等. tyrosine kinase ror1 as a target for anti-cancer therapies. [j] .front oncol, 2021, 11: 680834.
2]karvonen hanna, barker harlan, kaleva laura et al. molecular mechanisms associated with ror1-mediated drug resistance: crosstalk with hippo-yap/taz and bmi-1 pathways. [j] .cells, 2019, 8: undefined.
3]spencer park, courtney simianer, sydney spadinger, et al; abstract 2754: lyl797, a ror1 car t-cell therapy with genetic and epigenetic reprogramming for solid tumors. cancer res 15 june 2022; 82 (12_supplement): 2754.
4]jahan salar khalili, et al; abstract 5679: tetra-specific antibody gnc-035: guidance and n**igation control (gnc) molecule development for treatment of ror1+ malignancies. cancer res 1 april 2023; 83 (7_supplement): 5679.