單轉殖抗體 (mAb) 由與特異性抗原高度特異性結合的 B 淋巴細胞的單個轉殖產生。 除蛋白質結構外,單轉殖抗體的聚醣鏈對其功能、生物分布、免疫原性和穩定性也有重要影響。 因此,分析單轉殖抗體的糖型是藥物開發的關鍵步驟。
以下是分析單轉殖抗體糖型的常用方法:
1.毛細管電泳-質譜 (CE-MS):
該方法特別適用於正糖型的分析。 毛細管電泳用於分離糖型,而質譜法用於結構鑑定。
2.液相色譜-質譜聯用(LC-MS):
可用於N-糖和O-糖的分析。 聚醣首先使用酶消化或化學方法從抗體中釋放,然後使用液相色譜法進行分離,並通過質譜法進行結構鑑定。
3.螢光標記和HPLC分析:
聚醣首先釋放並與螢光標籤反應,然後使用HPLC分離和定量。
4.凝集素印跡:
使用特異性糖凝集素與特異性糖結構結合可用於鑑定特異性糖型結構。
5.NMR(核磁共振):
可以提供有關糖結構的詳細資訊,但需要大量的樣品,並且技術要求很高。
6.酶聯免疫吸附測定 (ELISA):
特異性糖型結合蛋白或抗體用於檢測和定量聚醣。
每種技術都有其優點和侷限性。 選擇哪種方法通常取決於分析目的、可用樣品量、所需的靈敏度和解像度以及可用的儀器。 在藥物開發的不同階段,可能需要多種技術來全面評估產品的糖型異質性和一致性。