蛋白質翻譯後修飾組學中的平行反應監測(PRM)方法

Mondo 教育 更新 2024-02-24

蛋白質翻譯後修飾(PTM)組學是一門研究蛋白質翻譯後修飾的整體狀態和動態變化的學科。 它涉及多種PTM型別,如磷酸化、乙醯化、相撲、泛素化、甲基化等。 為了高效、準確地檢測和定量蛋白質的PTM狀態,質譜技術,特別是平行反應監測(PRM)等靶向質譜方法已被廣泛應用。

平行反應監測 (PRM) 是一種靶向質譜策略,用於高選擇性、靈敏度和準確的 PTM 定量。 以下是關於蛋白質翻譯後修飾組學中PRM的一些關鍵要點:

1.工作原理:

PRM策略使用高解像度和質量精確的儀器來監測特定的母子離子對。 這意味著在質譜實驗中只能檢測到預先選擇的特定 PTM 位點或肽。

2.樣品製備:

樣品通常被消化,然後根據特定的PTM富集,例如使用金屬親和色譜法的磷酸化肽。

3.針對:

PRM 是一種靶向策略,需要事先了解要監測的目標 PTM 肽。

4.定量能力:

通過測量預選肽中的特定破碎離子,PRM可提供高度準確的定量資訊,通常與內標肽結合使用以提高定量準確性。

5.應用:

PRM 適用於驗證非靶向質譜實驗中發現的 PTM 或生物樣品中的精確定量。

6.與 SRM MRM 的比較:

PRM 類似於選擇性反應監測 (SRM) 或多反應監測 (MRM),但 PRM 通過使用高解像度儀器檢測所有可能的破碎離子來提供更多資訊。

PRM 為蛋白質 PTMOMICS 研究提供了強大的工具,尤其是在需要高度定量準確性和可重複性的情況下。 它已被廣泛應用於各種生物樣本和疾病模型中,以揭示PTM的功能和調控機制。

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