蛋白質 SUMOLATION 是一種重要的翻譯後修飾過程,涉及小泛素樣修飾蛋白 (SUMO) 與靶蛋白的共價結合。 相聚化在許多生物過程中起著重要作用,例如核轉運、轉錄調控、細胞週期程序和應激反應。 以下是檢測蛋白質相撲化的常用方法:
1.western blot:
使用特異性抗SUMO抗體,可以直接檢測經過SUMO修飾的蛋白質。 Sumoization通常會導致蛋白質分子量的增加,這可以在電泳分離後觀察到。
2.免疫沉澱 (IP) + 蛋白質印跡:
首先用特異性抗體從細胞裂解物中沉澱目標蛋白,然後使用抗 SUMO 抗體通過蛋白質印跡檢測 SUMO 狀態。
3.親和純化後的質譜分析:
通過對SUMO結合位點進行親和純化,可以從複雜樣品中富集SUMO基化蛋白,然後使用質譜法進行鑑定。
4.生物發光共振能量轉移 (BRET):
細胞內檢測相撲的動態過程。 它通常涉及將螢光蛋白和螢光蛋白標籤分別附著在靶蛋白和 SUMO 上,然後通過測量兩者之間的能量轉移來檢測它們的相互作用。
5.共聚焦螢光顯微鏡:
使用螢光標記的SUMO和目標蛋白,可以直接在細胞內視覺化基於SUMO的修飾的位置和動力學。
6.酶聯免疫吸附測定 (ELISA):
使用特異性抗SUMO抗體,可以定量SUMO蛋白。
相關問題答案
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